Questions cours : méthode de Sanger (séquençage ADN)

[Ptit_Lu]

Bonjour,

Je me pose des questions à propos de certains points du cours de génome qui ne sont pas tout à fait clairs pour moi :

 d.128 : méthode de Sanger (p.33 poly TAT)

J'ai du mal à comprendre cette méthode de séquençage de l'ADN : le fluorophore est bien placé sur une des extrémités (5') ou (3')? Dans ce cas là, pourquoi nous dit-on ensuite que l'on ne le place pas sur le ddNTP (qui est pourtant bien en 3'), comment le signal est-il alors visualisable pour séquencer l'ADN?

Ensuite pour la réalisation de la méthode de Sanger à proprement parler : si j'ai bien compris, on ajoute pour chaque base à hybrider, un ddNTP différent à la fois, si l'élongation s'arrête lors de l'ajout du ddNTP, alors on peut connaître précisément la position de la base. On forme un nouveau brin d'ADN avec des dNTP de la séquence que l'on connaît désormais, puis on recommence l'étape décrite précédemment. On répète cela jusqu'au séquençage complet du brin d'ADN étudié, c'est bien ça ? :/

Merci d'avance ^^

 

[Clemsoin]

http://tutoweb.org/forum/topic/8127-m%C3%A9thode-sanger/