Skalbain Posted March 20 Posted March 20 QCM 12 Afin d'étudier la protéine PAF, un plasmide d'expression dans lequel PAONe de PAF fusionné avec une séquence codant une étiquette histidine, est placé Sous la dépendance d'un promoteur hépatocyte spécifique a été obtenu. Des hépatocytes de lapin Ont été transfectés avec le plasmide puis cultivés pendant 48h. les protéines des hépatocytes sont ensuite extraites. PZ A ) L'extrait cellulaire obtenu à partir des hépatocytes est réalisé à l'aide tampon B) L'extraction celulaire est réalisée a 4° pour maintenir une bonne solubilité des protéines. La B est dite fausse et comme justification : pour dénaturer, vous pouvez expliquer svp. Je pense c 'esrrt en lien avec cette aprtie du cours : Mélange tissu, organe ou cellules + TAMPON DE LYSE à 4°C Composition du tampon de lyse : • Solution tampon (pH=6,5 - 8) • Sels (NaCl, MgCl2 ) • Anti-protéases et anti-phosphatases • DNases • (Détergent) + méthodes d’extraction Merci Ainsi la phase de lavage c'est pour faire sortir toutes les prot qui nous interessent pas et celle d'élution sert a faire sortir la prot qui nous interesse ? Quote
Tuteur Solution Lune_ Posted March 20 Tuteur Solution Posted March 20 Le tampon à 4°C permet d'inhiber l'activité des protéases (ces enzymes fonctionnent moins bien à cette température), ainsi on évite de les dégrader (puisque c'est ce qu'on veut récupérer). Mais cela n'a pas de lien avec leur solubilité. Effectivement dans une chromatographie la phase de lavage permet de faire sortir tout ce qui n'est pas retenu (dont les protéines qui ne nous intéresse pas), et l'élution permet de récupérer la fraction qui a été retenue, donc la protéine d'intérêt. An-Schwann and Batman_sans_Robin 2 Quote
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