haterdelue1 Posted March 16 Posted March 16 Bonjour, je ne comprends pas du tout l’item d du qcm ci-dessous : https://ibb.co/Kcm7JgXw comment savoir si la prot est phosphorylé ou non? merci d’avance, bonne journée Quote
Tuteur Adelta_apical Posted March 16 Tuteur Posted March 16 Salut ! On te dit que le lysat est divisé en deux parties: -une partie NT -une partie traitée avec phosphatase Ce qui faut comprendre c’est que si il y a un traitement par phosphatase alors il y a peut être un groupement phosphorylé à enlever (car c’est l’action de cette enzyme, à l’inverse des kinases qui permettent de phosphoryler des molécules). Hors on voit sur le graphique que pour l’échantillon NT, il y a bien interaction des protéines B et des micro tubules. Alors que lorsque on est face à l’échantillon traité (donc par les phosphatases ou “gommeurs de phosphorylation”, la protéine A n’est plus identifiée et il n’y a pas d’interaction entre les protéines B et les micro tubules. Ce qui nous permet de conclure qu’il y a une dépendance à la phosphorylation de À pour que l’interaction se fasse. C’est plus clair pour toi ? An-Schwann, Batman_sans_Robin and thomASTROCYTE 3 Quote
haterdelue1 Posted March 16 Author Posted March 16 C’est plus clair merci! par contre ce que je comprends pas c’est comment on peut voir pour l’échantillon traité qu’il n’y a plus d’interaction entre la prot A et les MT? mon raisonnement ça serait de regarder sur la piste 2 où on a la présence de l’échantillon traité, et là on voit que y a une marque au niveau des ac anti prot B et anti mt donc qu’il y a une interaction? je comprends pas trop? Quote
Tuteur Adelta_apical Posted March 16 Tuteur Posted March 16 J’ai peut être répondu trop vite désolée ! En gros si tu regardes la deuxième colonne du lysat traité, tu te rends compte que dans le lysat au départ il y a présence de la protéine À et de la protéine B (partie basse du schéma ) . Et si tu regardes sur le pull down (donc ce qui a été “agrippé “ par les microtubules il y a les AC anti protéines B mais pas les AC anti protéines A ce qui montre que les protéines A ont besoin d’être phosphorylées pour se lier aux microtubules. Est-ce que cette fois c’est plus clair ? An-Schwann 1 Quote
haterdelue1 Posted March 16 Author Posted March 16 Et donc si je comprends bien on sait que ça se lie aux mt sur cette piste car on a les billes mt marquées d’un +? je crois avoir compris merci beaucoup!!! bonne soirée Quote
Tuteur Solution Adelta_apical Posted March 16 Tuteur Solution Posted March 16 Non pas tout à fait, Enfaite il faut comprendre que quand il y a un + ça veut dire que la molécule est présente dans le lysat. La technique du pull down consiste à fixer des molécules sur une sorte de plaque (ici des microtubules), et à faire passer par dessus un lysat contenant des cellules, et d’autres molécules. En passant, les molécules du lysat vont se fixer aux molécules de la plaque. Et cette plaque va ensuite être analysée par western blot, ainsi si les molécules sont présentes elles seront représentées sur le western par une bande. Donc si on analyse pas à pas la deuxième colonne on peut voir que le lysat traité est présent et les billes de microtubules aussi. En descendant on analyse le pull down, donc après passage du lysat sur la plaque et analyse de celle-ci on comprend que les tubulines sont présentes (normal car les MT le sont aussi), la protéine A n’est pas présente (normal car elle n’est pas sous sa forme phosphorylée cf question du dessus) et la protéine B est présente. Si on descends encore d’un graphique on analyse la phase avant le pull down, c’est le lysat cellulaire en lui-même. La présence des protéines A et B est donc normale. Est-ce que tu as tout compris? haterdelue1 and An-Schwann 1 1 Quote
haterdelue1 Posted March 16 Author Posted March 16 Oui j’ai tout compris merci beaucoup pour tes nombreuses réponses!!! bonne soirée!!! Adelta_apical 1 Quote
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