Annale 23/24

[GlYcine]

Bonjour (re moi avec les plasmides ), je ne comprends pas pourquoi l’item B est juste en sachant que l’enzyme de restriction Xmn1 est située avant le promoteur, je ne vois pas, comment on peut obtenir 3 plasmides ? Et dans l’item on nous dit qu’il y a digestion par Xmn1 et Nco1 sauf que je me suis dit au départ que ce n’était pas possible car que il n’y a que Nco1 sur le plasmide FIX? 
Voici le QCM qui me pose problème : https://ibb.co/rRYY2zvY et https://ibb.co/jk0r89Fy

 

Merci d’avoir pris le temps de répondre à ma question et de m’aider !!

[Androma]

Salut !

 

La première chose qu'on fait ici, c'est digérer les deux plasmides par Nco1. Ensuite on isole l'ADNc codant pour le facteur IX et on le met avec le plasmide pTG. On met une ligase et on espère que l'ADNc s'insère dans pTG. Il y a 3 possibilités : soit l'ADNc ne s'insère pas et pTG se referme sur lui-même, soit l'ADNc s'insère dans le bon sens, soit il s'insère dans le mauvais sens. C'est le cas car on a fait un clonage non orienté.

 

Dans l'item B, on cherche à savoir quelles bactéries ont intégré un plasmide ayant intégré l'ADNc (qu'importe le sens) en utilisant Xmn1 et Nco1. Sur les plasmides recombinants, il y aura 3 coupures et donc 3 morceaux : 2 sites Nco1 et 1 site Xmn1. Alors que le plasmide non recombinant (donc pTG) ne sera coupé que 2 fois : 1 site Nco1 et 1 site Xmn1. Il y aura donc 2 bandes au Western Blot. On pourra donc bien identifier les plasmides recombinants avec Nco1 et Xmn1.

 

Est-ce que c'est plus clair pour toi ?

[An-Schwann]

Je précise qu'ici on cherche juste a savoir si on a un plasmide recombinant ici, on ne cherche pas a trouver le sens d'insertion du plasmide. 

[GlYcine]

Merci énormément à vous deux c’est hyper clair !! Bonne après-midi !

[Adelta_apical]

Salut si jamais j’ai fais un schéma si d’autres personnes ont du mal à comprendre. Ça peut aider dans ce genre de situation et éviter de faire des erreurs. Bonne après midi !

IMG_0906.pdf

[GlYcine]

Wow merci beaucoup c’est trop gentil !