QCM

[letartare06]

Salut je ne comprends pas du tout comment résoudre ce genre de QCM je suis perdu pourtant j'ai compris le cours mais quand je veux refaire et que je regarde la correction je ne comprends même pas

https://ibb.co/KcvsCpf0

https://ibb.co/YFj3GWSN

Mercii

[Nentiqu]

Coucouuu, je vais essayer de t'expliquer, mais si tu ne comprends toujours pas n'hésites pas à venir en permanence,
 

QCM 3:
A) Faux, ce n'est pas le rôle d'une séquence signal, elle ne modifie pas l'expression, ce serait plutôt un promoteur spécifique qui pourrait jouer sur l'expression de SDF-1 dans le noyau.

B) Faux, Il n'y a pas de gène codant la résistance à la puromycine dans le plasmide 1, (en revanche dans le plasmide 2 il y en a bien un et sous la dépendance d'un promoteur eucaryote constitutif). On ne peut donc pas sélectionner les cellules transfectées par le plasmide 1 avec la puromycine, car elles mourraient.

C ) VRAI : On voit qu'on a dans chacun des deux plasmides un gène codant la résistance à l'ampicilline à la suite d'un promoteur procaryote constitutif, les bactéries possédant le plasmide 1 ou le plasmide 2 seront donc résistantes et pourront être sélectionnées grâce à l'ampicilline.

D) VRAI : Si on regarde attentivement notre plasmide 2, on voit que le promoteur eucaryote de l'ADN de SDF-1 est en sens inverse, ce qui nous donne un ARN interférent / un shRNA  (comme écrit sur le schéma) car du coup la transcription se fait à l'envers (Cf. Génome S1) et cet ARN à l'envers va être complémentaire de l'ARN codant pour SDF-1 (dans le bon sens), ce shRNA va donc venir inhiber la traduction de SDF-1. On l'observe également dans la figure 3 où on voit que sans transfection nos cellules contrôle produisent du SDF-1 (partie cellules lysées) et qu'il est également secrété puisqu'on le retrouve dans le surnageant de culture.
Les cellules transfectées par le plasmide 1 en produisent et en secrètent plus, car elles ont un ADNc codant SDF-1 sous la dépendance d'un promoteur eucaryote constitutif dans le bon sens.
En revanche on voit bien que nos cellules transfectées par le plasmide 2 produisent moins de SDF-1 que nos cellules contrôles et n'en secrètent plus (plus rien dans le surnageant), notre shRNA inhibe donc bien l'expression de SDF-1 chez ces cellules.

E) VRAI : Comme dit au-dessus, on voit bien sur la figure 3 qu'on a de plus grosses bandes de SDF-1 chez les cellules transfectées par le plasmide 1 que chez les cellules contrôle.

QCM 4:

A) FAUX: On transfecte des fibroblastes humains (=cellules eucaryotes), hors le gène de résistance à l'ampicilline est sous la dépendance d'un promoteur procaryote constitutif, nos fibroblastes mourraient donc et ne pourraient pas être sélectionnés en présence d'ampicilline.

B) VRAI : L'ADN codant pour un shRNA dirigé contre SDF-1 est sous la dépendance d'un promoteur eucaryote constitutif,  nos fibroblastes (eucaryotes) même une fois injectés dans l'animal, continueront de l'exprimer.

C) VRAI: C'est bien un traitement de thérapie génique ex-vivo puisque l'on modifie des cellules à l'extérieur du corps avant des les injecter / réinjecter, sans pour autant modifier le génome des autres cellules de l'individu.

D) FAUX: Comme expliqué au-dessus on ne modifie pas le génome de toutes leurs cellules puisque l'on ne modifie pas de cellules germinales (donnant les gamètes = transmission).

E) VRAI : Effectivement si on transfecte des fibroblastes codant une protéine fluorescente verte (GFP), on peut analyser le devenir de ces cellules via une caméra à fluorescence.

Est-ce que c'est plus clair pour toi?
Bon courage! 




 

[letartare06]

Merciiiiii bcppp pour toutes les explications. Juste je ne comprends pas très bien la D du premier QCM je ne comprends pas ceux qui change si c'était pas en sens inverse. Après pour le reste j'ai tout compris c'est plus clair merciii

[Nentiqu]

Il y a 11 heures, letartare06 a dit :

Merciiiiii bcppp pour toutes les explications. Juste je ne comprends pas très bien la D du premier QCM je ne comprends pas ceux qui change si c'était pas en sens inverse. Après pour le reste j'ai tout compris c'est plus clair merciii

Re Coucou, je ne sais pas si on vous en a parlé en cours cette année, retiens juste qu'un ADN transcrit à l'envers (sur nos plasmides c'est via un promoteur en sens inverse de la séquence d'ADNc) va donner un ARN inhibiteur (= ARN antisens = ARN inhibiteur, dont les shRNA font partie) de l'ARNm de base (celui transcrit dans le bon sens), ici dans ce QCM on avait directement d'écrit que l'ADN coderait pour un shRNA et avec la figure 3 on voyait que ce shRNA inhibait bien donc on pouvait répondre sans connaissances.
En fait tu vas transcrire un des deux brins de ton ADN en ARNm qui sera ensuite traduit en protéine, mais si tu transcrit à l'envers ce même morceau de brin d'ADN, tu obtiens un ARN interférent qui sera complémentaire de ton ARNm et qui ira inhiber la traduction (si la correspondance est pas parfaite) ou entraîner la dégradation de ton ARNm si ça correspond bien.
Le génome est un peu lointain pour moi pour pouvoir rentrer dans les détails, du coup je te laisse ce post qui l'explique aussi :

Sinon peut être que @An-Schwannsaurait mieux expliquer / plus en détails

Bon courage !

Edited March 5 by Nentiqu

[An-Schwann]

5 hours ago, Nentiqu said:

Re Coucou, je ne sais pas si on vous en a parlé en cours cette année, retiens juste qu'un ADN transcrit à l'envers (sur nos plasmides c'est via un promoteur en sens inverse de la séquence d'ADNc) va donner un ARN inhibiteur (= ARN antisens = ARN inhibiteur, dont les shRNA font partie) de l'ARNm de base (celui transcrit dans le bon sens), ici dans ce QCM on avait directement d'écrit que l'ADN coderait pour un shRNA et avec la figure 3 on voyait que ce shRNA inhibait bien donc on pouvait répondre sans connaissances.
En fait tu vas transcrire un des deux brins de ton ADN en ARNm qui sera ensuite traduit en protéine, mais si tu transcrit à l'envers ce même morceau de brin d'ADN, tu obtiens un ARN interférent qui sera complémentaire de ton ARNm et qui ira inhiber la traduction (si la correspondance est pas parfaite) ou entraîner la dégradation de ton ARNm si ça correspond bien.
Le génome est un peu lointain pour moi pour pouvoir rentrer dans les détails, du coup je te laisse ce post qui l'explique aussi :

Sinon peut être que @An-Schwannsaurait mieux expliquer / plus en détails

Bon courage !

Oui c’est ca, après la prof met plus des choses aussi complexe au concours