haterdelue1 Posted February 27 Posted February 27 Bonjour, je ne comprends jamais comment il faut résonner pour ce genre de qcm, même avec la correction je suis perdue.. https://ibb.co/rK2djFNQ j’essayais de regarder par rapport à la cb paire de base se trouve l’enzyme de restriction et si ça correspond aux chiffres donner par MT mais j’imagine que ça n’a rien a avoir puisque ça indique seulement le poids des enzymes. qqn pourrait m’éclairer? meric d’avance, bonne après-midi Quote
Tuteur Lune_ Posted February 27 Tuteur Posted February 27 Salut est-ce que tu as peut être le plasmide qui va avec ce qcm pour que j'essaie de t'expliquer tout ça stp ? Quote
Responsable Matière An-Schwann Posted February 27 Responsable Matière Posted February 27 11 minutes ago, Lune_ said: Salut est-ce que tu as peut être le plasmide qui va avec ce qcm pour que j'essaie de t'expliquer tout ça stp ? Voici les plasmide: Et voici les deux possibilités d'insertion, je te laisse tout expliquer @Lune_ haterdelue1 and Lune_ 1 1 Quote
Tuteur Solution Lune_ Posted February 27 Tuteur Solution Posted February 27 Alors ce qui bien dans ces qcms c'est de de bien dessiner les possibilités de plasmides si c'est pas fait (ici c'est bon): sens, mauvais sens, et sans insertion/nu, et de placer les sites de restrictions pour pouvoir répondre au qcm 2. Ensuite il faut regarder pour chacune des possibilités d'insertion les fragments que tu dois retrouver après digestion et puis il faut comparer avec l'électrophorèse pour savoir quel type d'insertion correspond à quelle colonie. Enfin tu peux répondre aux items. La digestion par BamH1 nous permet de savoir si on le clonage a fonctionné ou non: si on deux fragments, cela veut dire qu'il y deux sites de restrictions comme on le voit pour le plasmide recombinant, sinon cela veut dire s'il n'y en avait qu'un seul donc il n'y a pas eu d'insertion et donc il n'y a qu'un site BamH1 (plasmide pBBL). Le site EcoR1 est au milieu de la séquence donc il donne pas d'indication au sens d'insertion en fonction de la taille des fragments obtenus après insertion. Sur l'électrophorèse, MT correspond aux marqueurs de taille et nous permet la taille de fragments de chaque bandes obtenues par digestion. Avec ça on compare avec les tailles de fragments que l'on va trouver théoriquement: Pour le plasmide sens pBBL-LK: Digestion avec BamH1: on a deux sites donc on aura deux fragments: un de 5200 - 3100 = 2100 pb et un autre de 7300 - 2100 = 5200 pb. Digestion avec EcoR1: on a deux sites donc on aura deux fragments: un de 4150 - 2800 = 1350 pb et un autre de 7300 - 1350 = 5950 pb. Digestion avec Xho1: on a deux sites donc on aura deux fragments: un de 4550 - 3000 = 1550 pb et un autre de 7300 - 1550 = 5750 pb. En comparant les tailles de fragments avec celles sur l'électrophorèse, on remarque qu'elles correspondent à celle de la colonie 1. Donc la colonie 1 a un plasmide avec une insertion dans le bon sens. Pour le plasmide pBBL-LK-MauvaisSens: Digestion avec BamH1: on a deux sites donc on aura deux fragments: un de 5200 - 3100 = 2100 pb et un autre de 7300 - 2100 = 5200 pb. Digestion avec EcoR1: on a deux sites donc on aura deux fragments: un de 4150 - 2800 = 1350 pb et un autre de 7300 - 1350 = 5950 pb. Digestion avec Xho1: on a deux sites donc on aura deux fragments: 3750 - 3000 = 750 pb et un autre de 7300 - 750 = 6550 pb. On refait la même chose que pour l'autre plasmide et on voit que la taille de fragments correspond aux fragments obtenus pour la colonie 3. Don elle a inséré la séquence dans le mauvais sens. Pour le plasmide nu: Ce plasmide correspondra au plasmide receveur pBBL n'a qu'un seul site de restriction pour ces enzymes. Donc on aura un fragments après chaque digestions de la taille du plasmide: 5200pb. Cela correspond à la colonie 2, donc elle ne contient pas la séquence LK. Maintenant on peut répondre aux items: Le plasmide de la colonie 3 correspond à celui avec la séquence dans le mauvais sens, on peut donc la transcrire grâce au promoteur (qui est le bon), mais pas la traduire. L'item B est donc vrai. La colonie 2 n'a pas la séquence donc ça correspond en soit au plasmide receveur pBBL, l'item C est vrai. Comme EcoR1 est au milieu de la séquence, après digestion on aura toujours des fragments de même taille quel que soit le sens d'insertion, donc l'item D est Faux. Le plasmide de la colonie 1 possède la séquence dans le bon sens, donc on peut transcrire et traduire la séquence, et ainsi avoir des modèles qui possède cette protéine, l'item E est vrai. Voilàà, désolée c'est hyper long, mais c'est pas les qcms les plus faciles, l'important c'est de bien comprendre et s'entraîner ! N'hésite pas si t'as d'autres questions ! tablatte, haterdelue1, Rif-Power and 2 others 2 2 1 Quote
haterdelue1 Posted February 28 Author Posted February 28 Merci bcp pour les explications hyper détaillées @Lune_!!!!! C’est vrm plus clair bonne journée An-Schwann 1 Quote
Medic Posted March 2 Posted March 2 Bonjour, dans ce qcm, je ne comprends pas comment on trouve les valeurs initiales pour soustraire ? Par exemple, pour le plasmide sens le 4150 - 2800 ? Je n’arrive pas trop à les dessiner donc je pense que ca me bloque pour situer mauvais ou bon sens Merci d’avance, bonne journée Quote
Tuteur Androma Posted March 2 Tuteur Posted March 2 Salut ! Pour calculer la taille des morceaux après digestion pas des enzymes, il faut prendre l'emplacement du site de l'enzyme en question. Sur le plasmide sens, il y a 2 sites pour EcoR1 : sur la 2800ème paire de base et sur la 4150ème. Lorsque tu vas couper, pour connaitre la taille des morceaux, il faut utiliser les chiffres de ces bornes-là. Lorsque tu fais 4150-2800 tu obtiens 1350pb : c'est la taille du petit morceau. Pour connaître la taille du grand morceau, on prend la taille totale et on soustrait la taille du petit morceau : 7300-1350 = 5950 On peut faire avec une autre enzyme : Xho 1 dans le plasmide bon sens. Il a deux sites : sur la 3000° paire de bases et sur la 4550°pb. On fait donc 4550-3000=1550pb : c'est la taille du premier morceau. Ensuite le plasmide fait 7300pb, donc 7300-1550=5750pb : la taille du deuxième fragment. Est-ce que c'est plus clair pour toi ? An-Schwann 1 Quote
Medic Posted March 3 Posted March 3 Oui merci Mais je n’arrive pas à dessiner les deux possibilités de plasmide. Je comprends qu’il faut insérer la region que l’on cherche dans la plasmide receveur mais pour les bons ou mauvais sens d’insertion c’est compliqué. Désolée Quote
Tuteur Androma Posted March 3 Tuteur Posted March 3 Le 27/02/2026 à 14:27, An-Schwann a dit : Voici les plasmide: Et voici les deux possibilités d'insertion, je te laisse tout expliquer @Lune_ Ici tu as les deux insertions possibles. En gros sur ta feuille, tu fais un gros cercle, t'as pas besoin de recopier tout le plasmide, juste la zone dans laquelle on insert (le promoteur et terminateur autour par exemple) en laissant un grand espace vide là où y'a le site de restriction de l'enzyme que t'utilises pour l'insertion. Soit tu utilises 1 seul enzyme, du coup il faut juste ouvrir, écarter les 2 côtés, soit tu utilises 2 enzymes, alors il ne fait pas oublier d'enlever la séquence entre les deux enzymes. Puis tu insères ta séquence d'intérêt. Soit, comme ici, tu as 1 enzyme, donc le gène peut s'insérer dans les deux sens : quand tu recopies sur ta feuille, faut faire 2 plasmides, et la différence ça va être l'emplacement des sites de restriction ou du codon ATG/STOP si ils sont précisés. Ici tu vois que dans le plasmide de base (p90) le site de Xho1 était à la fin, après EcoR1. Donc le ''bon sens'' c'est le plasmide pBBL-LK car Xho1 est après ExoR1 (faut calculer exactement l'emplacement si on te demander de calculer les tailles comme ici) alors que dans le plasmide mauvais sens, Xho1 est avant EcoR1, donc le gène ne sera pas traduit car les codons seront inversés. (Pour savoir le bon sens, c'est le promoteur avant et le terminateur après, et le gène à la suite de la fléche du promoteur) Lorsque tu utilises 2 enzymes, il faut faire correspondre les sites, donc le bout BamH1 du plasmide va se connecter avec le bout BamH1 de la séquence d'intérêt, et le bout Bgl1 du plasmide se connecte avec le bout Bgl1 de la séquence d'intérêt (J'ai pris des enzymes qui pourraient fonctionner pour un clonage orienté si tu veux essayer de redessiner ce plasmide). C'est pas très clair à l'écrit, n'hésite pas à venir en permanence pour qu'on fasse avec toi ! An-Schwann and Batman_sans_Robin 2 Quote
Recommended Posts
Join the conversation
You can post now and register later. If you have an account, sign in now to post with your account.
Note: Your post will require moderator approval before it will be visible.