Méthode de Sanger et brin synthétisé ?

[Rif-Power]

Bonjour, en refaisant le TD de pharma sur les techniques d'études du vivant, je me suis rendu compte que je ne sais pas lire le brin synthétisé sur le graphique. La correction dit lecture du bas vers le haut mais je vois pas comment on trouve la séquence à partir des résultats. 

 

Si qlq peut m'expliquer, je suis pourtant aller au TD mais je me souviens pas de ça. Merci d'avance.

[Androma]

Salut !

Pour faire un séquençage, on utilise des didésoxyribonucléotides (ddATP, ddTTP, ddCTP, ddGTP), qui von stopper la synthèse du brin, puisqu'elles n'ont pas de OH en 3' pour qu'on autre nucléotide s'accroche. On fait une énorme quantité de PCR pour que statistiquement, on est des bouts de touts les longueurs possibles, des brins arrêtés à chaque nucléotide. 

On réalise ensuite un Western Blot, qui sépare les molécules en fonction de la taille : ce qui est le plus court peux aller le plus loin, alors que les plus grosse restent proche du départ. Le départ, c'est les puits symbolisés en haut de la plaque. On a 1 colonne par ddXTP. Il faut donc lire de bas en haut le WB pour lire la séquence. Ici, on a AGTTACCGTCTGC

 

est-ce que c'est plus clair pour toi maintenant ?