QCM 1 colle numéro 2

[MB32]

Coucou, je ne comprends pas trop comment on sait qu'on a pris l'ADNc de la VFP qui était dans pPOMNI et qu'on la mis dans pJAX et pas l'inverse ?

C'est l'item D du qcm 1 de la colle n°2 du s2

[Vico-lesterol]

Salut ! Je regarde ça rapidement et je te réponds. 

[Vico-lesterol]

Pour répondre à ta question : Pour créer le plasmide souhaité on cherche à récupérer la séquence d'ADNc codant pour la VFP dans le plasmide pPOMNI pour le transférer en aval du promoteur eucaryote épidermique spécifique du plasmide pJAX. Le problème est qu'on cherche à l'insérer dans le bon sens sinon ça ne marche pas, il faut donc qu'on sélectionne deux enzymes communes aux deux plasmides qui vont nous permettre de l'insérer au bon endroit et dans le bon sens. Donc dans un premier temps il faut que tu regardes si les enzymes proposées permettent de récupérer la séquence qui nous intéresse, ici Xho1 et Not1. Là ça marche car Xho1 est en amont de la séquence d'intérêt et Not1 est en aval. Maintenant il faut checker si ça marche pour le plasmide pJAX, que ça l'insère au bon endroit et dans le bon sens. C'est bon aussi car on voit qu'après le promoteur qui nous intéresse on a bien les sites de coupure de Xho1 et Not1 dans le même ordre que dans le plasmide pPOMNI, il n'y a donc qu'une seule possibilité pour le sens d'insertion du plasmide, et c'est dans le bon sens. Donc maintenant tu as ton plasmide final parfait. Pour répondre à l'item D, on cherche à sélectionner les bactéries qui possèdent ce plasmide nouvellement formé. En gros il faut que tu te dises que la base du plasmide ça reste pJAX, tu remplaces juste le petit morceau entre Xho1 et Not1 par l'ADN codant pour la VFP. En sachant ça il faut donc utiliser un antibiotique pour lequel les bactéries possédant le nouveau plasmide soient immunisées. En regardant les gènes de résistances situés dans le plasmide pJAX on voit qu'il y a l'ampicilline et la pénicilline mais pas la puromycine. Donc tu ne peux pas utiliser la puromycine pour les sélectionner sinon tu les tueras et tu ne vas récupérer que celles qui ont le plasmide pPOMNI qui ne nous intéresse pas. J'espère que ça répond bien à ta question, c'est assez détaillé j'espère, si jamais n'hésites pas. Bon courage. 

Edited Thursday at 04:43 PM by Vico-lesterol