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Séquençage selon Sanger


Go to solution Solved by mate_ces_teh,

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Bonjour,

Il y a un détail qui me chiffonne un peu :) 

En fait dans le séquençage la lecture se fait dans le sens 5' 3' ce qui veut dire que la synthèse se fait dans le sens 3' 5' ce qui veut dire que quand on fait une électrophorèse, les fragments les plus petits sont plutôt du côté 3' ce qui veut dire que c'est eux qui vont migrer le plus loin et donc par conséquent quand on lit une plaque du bas vers le haut on lit la séquence dans le sens 3' 5' or pourtant c'est l'inverse. 

Si quelqu'un pouvait éclairer ma lanterne svp 🙏

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Salut !

 

Alors attention niveau formulation, que ce soit pour le séquençage selon Sanger ou un autre contexte, la synthèse d'ADN se fait toujours en 5'->3'.

 

Aussi un conseil ça va être de faire attention au sens de migration de l'électrophorèse car si elle est de bas en haut, les fragments les plus petits se retrouvent "en bas" (c'est le cas dans les diapos de cours), mais si c'est l'inverse ils se retrouvent "en haut".

 

Comme l'élongation se fait bien de 5' vers 3', les fragments les plus petits correspondront à la partie 5' de la matrice, et les plus longs iront jusqu'à la partie 3'. Pour lire dans le bon sens il faut donc bien commencer par les petits fragments.

 

J'éspère que c'est plus clair, hésite pas si besoin !

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