Qcm techniques d’études des protéines

[haterdelue1]

Bonjour, je ne comprends pas comment résoudre ce type de qcm : https://ibb.co/ZpM2TtSB

Est-ce qqn pourrait m’éclairer? Merci d’avance, bonne soirée 

[Nentiqu]

Coucou, dans ce QCM on a affaire à une chromatographie d'exclusion, dans cette dernière on va séparer des protéines en se basant sur leur masse moléculaire (en Kilodalton), on va verser le milieu contenant les protéines dans une colonne composée d'une phase stationnaire avec des billes possédant des pores dans lesquelles les petites molécules pourront se "faufiler" / "se coincer" mais pas les grosses molécules de sortes à les trier selon leur masse.
On obtient ensuite un chromatogramme semblable à celui-ci:

Les protéines lourdes sortent les premières et les plus légères, en dernières, en sachant que l'axe des abscisses représente le volume de solution versé permettant à nos molécules d'atteindre le bout de notre colonne) versé et les ordonnés l'absorbance, car nos protéines absorbent à une certaine longueur d'onde, donc un pic d'absorbance permet de les quantifier et de révéler leur présence, ainsi  dans cette solution on aurait 3 différentes tailles de protéines comme en témoignent les 3 pics. En sachant que le premier pic nous donne V0: le volume mort ou le volume à partir duquel on commence à avoir des protéines qui tombent, étant les plus grosses qui ne se sont pas accrochées (ça représente donc aussi le volume entre les différentes billes de notre colonne), tandis que les autres pics seront des molécules moins lourdes, avec un volume d'élution, volume auquel on les récupère pour une masse donnée.

À partir de ces résultats, si on a une protéine dont on ne connait pas la masse moléculaire et qu'on fait une chromatographie d'exclusion avec d'autres protéines de masse connue, on peut via la formule logarithme (qui n'est pas à connaître) faire une droite d'étalonnage, rectiligne permettant par proportionnalité de trouver la masse moléculaire de notre molécule d'intérêt:

On a donc en abscisse le logarithme de la masse moléculaire et en ordonné le volume d'élution relatif, qui vaut le Volume d'élution de notre protéine, divisé par le Volume mort de notre chromatographie soit Ve/V0.
Les protéines les plus légères se retrouvent donc en haut de la droite car leur volume d'élution (au numérateur) est plus élevé que celui des molécules lourdes, faisant grimper le volume d'élution relatif.

Avec toutes ces informations on peut désormais résoudre le QCM:

A. Faux, en voyant la courbe d'étalonnage, en prenant en compte le volume mort donné dans l'énoncé et le fait qu'on ait que la masse moléculaire des protéines comme information on comprend qu'on est face à une chromatographie d'exclusion.

B. Faux, si on fait un classement de masse moléculaire, BIP est la molécule la plus légère, elle devrait donc correspondre au point 1 de notre droite d'étalonnage.

C. Faux, Tic est la deuxième protéine la plus légère, elle correspond donc au point 2 de notre droite d'étalonnage, avec un volume relatif d'environ 2,25 hors le volume relatif = Volume d'élution / Volume mort et on sait que le volume mort vaut 20ml, donc Volume d'élution = Volume relatif x Volume mort = 2,25*20= 45 ce qui n'est pas du tout 10ml (qu'on arrondisse le volume relatif à 2 ou 2,5 ça marche quand même pas)

D. Faux, ici si on regarde au volume d'élution relatif 3, on voit qu'on est à peu prêt au niveau de notre protéine la plus légère, BIP qui fait 3400kDa, en se basant sur cette info et sur les autres protéines, on sait qu'une protéine de 18 000 kDa aurait un volume d'élution relatif plus faible (car étant plus lourde elle sortirait avec moins de volume d'élution).

E. Faux, ici même démarche que pour l'item C, on fait Volume relatif = volume d'élution / volume mort = 60 / 20 = 3, hors Bip aussi a un volume relatif de 3, donc leurs masses moléculaires sont équivalentes (elles seraient placées au même endroit sur notre droite d'étalonnage).
 
Voilà, en espérant avoir pu éclairer tout ça pour toi, bon courage !
 

Edited 3 hours ago by Nentiqu

[thomASTROCYTE]

Hello, ici c'est ce qu'on appelle une chromatographie d'exclusion où les protéines vont migrer en fonction de leur poids moléculaire : plus elle sera légé plus elle migrera loin.

Dans notre cas on a 1=BIP 2=TIC 3=BOP 4=TAC

 

A. FAUX on a dit que c'était une exclusion

B. FAUX au point 1

C. FAUX Ve/Vo=2.5  Ve/20=2.5  Ve=2.5*20=50mL

D. FAUX similaire à BOP donc Ve proche de 2

E. FAUX 60/20=30 donc elle a une masse = à BIP

 

En espérant t'avoir aidé !