khatabi Posted Sunday at 01:51 PM Posted Sunday at 01:51 PM Salut j'ai beaucoup de mal avec les exercice de technique d'ADN avec les plasmide quelqu'un pourrait m'éclairer avec un ex de qcm d'annale parce que je suis vraiment perdu a chaque qcm je comprend pas trop ce qu'il faut faire et je voit beacoup de personne de question la dessus mais je suis toujour perdu Quote
Tuteur Solution Androma Posted Sunday at 03:12 PM Tuteur Solution Posted Sunday at 03:12 PM (edited) Salut ! Je vais prendre comme exemple les QCM 1 et 2 session 1 de 2024-2025. QCM 1 : On cherche à mettre l'ADN de YFP, une protéine fluorescent présente dans le plasmide B, sous le contrôle d'un promoteur eucaryote cardiospécifique, dans le plasmide A. A. FAUX : le plasmide d'intérêt est le plasmide A, qui porte un gène de résistance à l'ampicilline, et non à la kanamycine. B. FAUX : on n'obtiendra pas un ARN antisens, mais je vais t'expliquer ce qui se passe : On va digérer les deux plasmides avec BamH1 et HindIII. Ces enzymes vont couper tous leurs sites de restriction. BamH1 a 1 site sur A à 790pb, juste après le promoteur d'intérêt, et 1 site sur B à 1220pb avant l'ADNc de YFP. HindIII a 1 site sur A à 800pb et 3 sites sur B : - le 1e à 1190pb avant l'ADNc - le 2e à 2530pb juste après l'ADNc avant le terminateur - le 3e à 3100pb plus loin dans le plasmide On peut faire un clonage orienté grâce à BamH1 et HindIII, car sur le plamide A le site de BamH1 est avant celui de HindIII, et sur le plasmide B BamH1 est avant l'ADNc et HindIII est après l'ADNc. La séquence va donc pouvoir s'insérer dans le bon sens. C. VRAI : si on prend que HindIII on peut aussi faire le clonage car il y a un site HindIII avant et après l'ADNc. D. VRAI : Xba1 est comme HindIII, on dit que le clonage est non orienté car la séquence peut s'insérer dans les deux sens, on ne choisis pas le sens dans lequel elle s'insère. E. FAUX : l'ADN codant pour la resistance à la pyromycine est sous contrôle d'un promoteur procaryote, donc il ne va pas être exprimé dans des cellules eucaryotes. Je te met les autres qcm après j'ai plus de place je peux pas mettre d'autres images. Edited Sunday at 03:34 PM by Androma apidé, An-Schwann and Batman_sans_Robin 2 1 Quote
Tuteur Androma Posted Sunday at 03:34 PM Tuteur Posted Sunday at 03:34 PM (edited) QCM 2 : Ils ont décidé de réaliser le clonage avec BamH1 et Xba1. Ils ont sélectionné les bactéries transformées et cherchent celles transformée par le plamide avec la bonne structure. Je te met les plasmides possibles : https://ibb.co/r2jyr7JJ A. VRAI : en utilisant BamH1, on aura 1 bande dans les deux cas, mais ils ne feront pas la même taille, celui dans lequel ça n'a pas fonctionné sera plus léger que celui dans lequel ça a marché. B. VRAI : EcoRV se trouve dans l'ADNc; donc on aura 2 bandes que si ça a fonctionné. C. FAUX : il n'y a de site Not1 que dans la plasmide B, pas dans le plasmide recombinant. D. VRAI : comme les amorces de PCR entourent l'ADNc, si ça a fonctionné la PCR pourra fonctionner. E. FAUX : la cytometrie en flux ne permet pas de transfecter des cellules, elle permet de les étudier. Pour transfecter des cellules, tu peux par exemple utiliser l'electroporation. Les techniques sont décrites dans le cours de la prof. Voilà ! Dis moi si tu as mieux compris ce qu'il fallait faire, si tu as des questions, et n'hésite pas à venir en permanence pour qu'on t'explique les qcm qui te posent problème, peut être que ce sera plus clair. Edited Sunday at 04:47 PM by Androma apidé and Batman_sans_Robin 1 1 Quote
apidé Posted Sunday at 05:21 PM Posted Sunday at 05:21 PM coucou:) j’avais le même problème je suis donc contente d’être tombé sur ton message j’ai fait les qcm en le regardant et ça m’a trop aidé mercii! juste je crois que je n’ai pas bien saisi l’image de tous les plasmides possible pour le 2, mais j’ai quand même compris ce qcm ducoup, j’ai pas compris à quoi ca servait ou alors j’ai du le faire petit à petit dans les qcm je ne sais pas. Androma and An-Schwann 2 Quote
khatabi Posted Sunday at 05:31 PM Author Posted Sunday at 05:31 PM merci beacoup j'ai comprit le qcm 1 mais rien comprit au qcm 2 et je comprend pas comment trouver le plasmide comme ta fait je suis dans le floue total Quote
Tuteur Androma Posted Sunday at 05:32 PM Tuteur Posted Sunday at 05:32 PM En gros quand tu fais une recombinaison, tu fais digérer par des enzymes, puis les bouts compatibles ensemble s'associent. Tu ne vas pas forcément avoir exactement le résultat que tu espérais. Par exemple dans les clonages non orientés, soit le plasmide d'origine se referme sur lui-même, sans la séquence d'intérêt, soit la séquence s'insère dans le bon sens, soit elle s'insère mais dans le mauvais sens. J'ai fait le schéma pour voir les deux plasmides qu'on peut obtenir (celui qu'on attendait avec la séquence et celui où ça n'a pas marché) pour voir où sont les sites de restriction pour répondre plus facilement aux questions du qcm. C'est utile lorsque tu as du mal à visualiser ce que tu obtiens, encore plus ici quand tu as beaucoup de sites à côté. C'est vrai que mon dessin n'est pas très beau apidé 1 Quote
khatabi Posted Sunday at 05:35 PM Author Posted Sunday at 05:35 PM mais j'ai pas comprit a quoi corresponder les bande ni vraiment le sens du qcm je veux dire Quote
Tuteur Androma Posted Sunday at 05:41 PM Tuteur Posted Sunday at 05:41 PM à l’instant, khatabi a dit : merci beacoup j'ai comprit le qcm 1 mais rien comprit au qcm 2 et je comprend pas comment trouver le plasmide comme ta fait je suis dans le floue total Pour le qcm 2, il faut déjà que tu visualise clairement le plasmide que tu as obtenu. Pour cela, fait toi un schéma où tu dessines la plasmide d'origine avec un trou entre les 2 sites où t'as coupé, puis dans ce trou tu mets la séquence que tu as récupérer avec ces mêmes sites. Puis n'oublie pas de rajouter les autres sites présents avant. Enfin il faut que tu recompte (quand t'as besoin d'avoir des chiffres précis pour une électrophorèse par exemple) le nombre de bases pour avoir la taille du nouveau plasmide et la place de chaque site. Quand tu fais un clonage non orienté où tu coupes sur le plasmide d'origine que sur 1 seul site, tu ne fais que agrandir le plasmide, mais quand tu fais un clonage orienté, tu coupes à deux sites, donc tu enlèves un morceau du plasmide d'origine, ce qu'il ne faut pas oublier quand tu calcules la taille du plasmide recombinant. Est-ce que c'est plus clair pour toi ? Batman_sans_Robin 1 Quote
Responsable Matière An-Schwann Posted Sunday at 05:53 PM Responsable Matière Posted Sunday at 05:53 PM Salut! Je profite pour ajouter que mercredi il y a une formation qui portera justement sur rma résolution de QCM de ce type, n'hésite pas d'y aller !!! Batman_sans_Robin and apidé 2 Quote
khatabi Posted Sunday at 05:54 PM Author Posted Sunday at 05:54 PM mercii je vais faire sa il y a 12 minutes, Androma a dit : Pour le qcm 2, il faut déjà que tu visualise clairement le plasmide que tu as obtenu. Pour cela, fait toi un schéma où tu dessines la plasmide d'origine avec un trou entre les 2 sites où t'as coupé, puis dans ce trou tu mets la séquence que tu as récupérer avec ces mêmes sites. Puis n'oublie pas de rajouter les autres sites présents avant. Enfin il faut que tu recompte (quand t'as besoin d'avoir des chiffres précis pour une électrophorèse par exemple) le nombre de bases pour avoir la taille du nouveau plasmide et la place de chaque site. Quand tu fais un clonage non orienté où tu coupes sur le plasmide d'origine que sur 1 seul site, tu ne fais que agrandir le plasmide, mais quand tu fais un clonage orienté, tu coupes à deux sites, donc tu enlèves un morceau du plasmide d'origine, ce qu'il ne faut pas oublier quand tu calcules la taille du plasmide recombinant. Est-ce que c'est plus clair pour toi ? moyennement dsl sa vient de moi j'irai a la formation et sinon a l'amphi si vraiment je bloque encore merci quand meme An-Schwann and Androma 2 Quote
apidé Posted Sunday at 05:59 PM Posted Sunday at 05:59 PM ok ok merci beaucoup @Androma:) j’ai bien compris! et tqt tes dessins sont bien clair! An-Schwann 1 Quote
Tuteur Androma Posted Sunday at 06:05 PM Tuteur Posted Sunday at 06:05 PM @khatabi Si tu vas à la formation, tu referas ce qcm après et tu nous dis si tu as bien compris ou pas. Batman_sans_Robin and An-Schwann 2 Quote
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