Méthodo QCM Techniques du vivant

[Estherification]

Coucouu je pense que je n'ai pas vraiment compris comment lire et interpréter les tableaux dans ce genre de qcms... Par exemple ici je suis bloquée sur les items C et D quelqu'un pourrait m'expliquer la méthodo svp? Et pour la E c'est juste pour être sûre : comme dans l'énoncé on dit que la Bglobine est une protéine cytosolique, ça veut dire qu'elle reste à l'intérieur de la cellule et qu'elle ne pourra donc pas être purifiée par le surnageant?

 

C) Le plasmide du clone N°4 permet la transcription de l’ADNc cloné à partir de son promoteur (VRAI)
D) Les cellules eucaryotes transfectées avec le plasmide du clone N°2 synthétisent de la βglobine recombinante (VRAI)
E) La βglobine produite par les cellules eucaryotes peut être purifiée à partir du surnageant de culture (FAUX)

 

[matthieucaryote]

Salut @Estherification!

 

Alors on va reprendre item par item. Mais il faut comprendre que sur le plasmide de la figure 1, on va garder la portion qui se trouve entre les deux BamH1 (à 3600pdb et à 4600 pdb) et qui contient l'ADNc codant la β-globine. Puis on va introduire de cette portion à la position de BamH1 du plasmide de la figure 2 (820 pdb).

⇒ Au final on a le plasmide 2 qui contient une partie du plasmide 2! C'est à partir de cela qu'on peut commencer à réfléchir à ces items.

 

 

Item C:

On te parle ici de transcription (ADN → ARN). Il nous faut donc pour cela:

• le promoteur eucaryote constitutif → OUI
• l'ADNc qui est placé dans le bon sens du promoteur → OUI 
• le terminateur  → OUI

Donc toutes les conditions sont réunies pour que le plasmide du clone n°4 permette la transcription de l'ADNc cloné. Ainsi tu peux remarquer que lorqu'on a digéré les clones 1, 2 et 4 avec BamH1 on a une partie de 1000 pdb qui correspond à la partie codant pour la β-globine et une partie de 4500 pdb qui correspond au plasmide 2 seul.

⇒ l'item C est bien vrai

 

 

Item D:

Pour qu'il y ait synthèse de la de la β-globine recombinante il faut qu'aient lieux la transcription puis la traduction. À l'item précédant on a vu qu'il n'y a pas de soucis pour la transcription. En observant le plasmide, il n'y a pas de stop prématuré ou de soucis de cadre de lecture ou quoi que ce soit qui empêcherait notre traduction. Et idem: l'électrophorèse nous donne raison. 

⇒ l'item D est bien vrai

 

 

Item E: 

La β-globine est une protéine cytosolique (comme rappelé dans l'énoncé). Par exemple on peut penser à sa présence dans le cytosol des hématies/GR où elle transporte l'O2 (hémoglobine): ces cellules n'ont pas de noyau donc elle ne peut pas être ailleurs que dans le cytosol!

Ainsi, la β-globine ne peut pas être présente dans le surnageant de culture de façon "naturelle". En effet, si tu veux trouver cette protéine, il va donc falloir lyser les cellules afin que le cytosol se déverse et que la β-globine se déverse hors des cellules. Tu as bien compris :)

⇒ l'item E est faux

 

 

Méthodo:

Pour ce genre de QCM il faut:

• bien lire l'énoncer pour comprendre tout et ne pas oublier d'infos.
• vérifier que rien ne manque (promoteurs, gènes, terminateurs, des parties codant pour des résistances à des antibios...)
• vérifier le sens des promoteurs 
• bien calculer le nombre de pdb des gènes, des plasmides ect pour bien lire l'éctrophorèse. Par exemple ici on avait la partie codante de la β-globine qui fait 1000 pdb (4600-3600 entre les deux BamH1) et le plasmide 2 de 4500 qui le reçoit → on retrouve tout cela à l'électrophorèse. Et au contraire le clone 3 ne correspond pas dutout donc il y a un soucis.

Voilààà j'espère que j'ai été assez clair et que tu a s pu comprendre. Si ce n'est pas le cas, si tu as d'autres questions ou besoin d'éclaircir un point, on reste dispo pour y répondre donc n'hésites surtout pas !

 Bonnes révisions et bon courage :)

 

 

 

 

 

 

 

 

[Estherification]

Merci bcp pour cette réponse super complète!