analyse de l'ADN

[fashiondesignaaaa]

coucou, je ne comprend pas bien l'item B , je pense que j'ai du louper une info ou mal comprendre, car dans l'item B on nous dit que HINDIII et pcil mais dans le plasmide on voit deux enzymes HINDIII donc je ne comprend pas laquel choisir , de meme quand on dit que c'est orienté ou non quelle est la différence et que cela signifie dans un QCM , merciii 

 

https://ibb.co/VcbSHR8v

[Hemilyse]

coucou ! 

quand on parle d'orienter ou de non orienter c'est le sens dans lequel va s'insérer le bout d'ADN dans le plasmide.

dans le cours de PASS on se contente de dire que le bout d'ADN peut "s'accrocher" au plasmide si on a couper les 2 bout avec la même enzyme.

si tu coupe tous avec la même enzyme le bout d'ADN peut s'insérer dans le bon sens, ou peut se retourner et donc s'insérer dans le sens inverse. C'est ce qu'on appel non orienter puisque tu as 1 chance sur 2 pour qu'il s'insère dans le bon sens (tu ne peux pas le contrôler).

Par contre si on dit que c'est orienter tu vas forcement avoir deux enzymes différentes qui vont intervenir pour couper chacun des bouts du plasmide, et donc le bout d'ADN ne pourra s'insérer que dans 1 sens avec les cotées ADN- plasmide couper par la même enzyme.

(je sais pas si c'est clair )

[An-Schwann]

1 hour ago, fashiondesignaaaa said:

coucou, je ne comprend pas bien l'item B , je pense que j'ai du louper une info ou mal comprendre, car dans l'item B on nous dit que HINDIII et pcil mais dans le plasmide on voit deux enzymes HINDIII donc je ne comprend pas laquel choisir , de meme quand on dit que c'est orienté ou non quelle est la différence et que cela signifie dans un QCM , merciii 

 

https://ibb.co/VcbSHR8v

Salut! 

Je rajoute pour l'item B ici on est dans le contexte du plasmide recombinant obtenu suite a manipulation fait dans l'énoncé. Le mieux, c'est de dessiner le plasmide obtenu pour déterminer ou ces deux enzymes couperont et a partir de ça, déterminer la longueur de ces fragments 

Est ce que c'est claire? 

[fashiondesignaaaa]

coucou ,désolé du délai , @Hemilyse, merci j'ai bien compris , @An-Schwann, j'ai toujours pas compris , en faite le fait qu'il y 'a deux site HIND III , ça me perturbe, est ce que quelqu'un pourrait me detailler comment repondre à l'item B SVP 

[Androma]

Salut !

 

Dans l'item B, on a déjà fait le plasmide recombinant décrit dans l'énoncé. On a donc déjà inséré le gène d'intérêt grâce à BamH1. Ici on cherche à l'analyser grâce à un autre enzyme : pcil.

 

On va donc faire digérer le plasmide rexombinant qu'on vient de faire par pcil. Il y a 2 sites de reconnaissance :

- sur le plasmide originel en position 200 

- sur la zone qu'on a rajouté en position 1200, donc en position 2130 sur le plasmide recombinant. 

Deux sites de reconnaissance donné deux coupure donc deux morceaux qui seront visible à l'électrophorèse. Il y aura donc 2 bandes à l'électrophorèse, et elle font bien 1930pb et 1600pb.

 

J'ai fait un schéma pour expliquer les manipulations et les calculs j'espère que c'est compréhensible 

[fashiondesignaaaa]

MERCI BIEN @Androma, j'ai bien compirs