Clonage orienté

[Ambryon]

bonjourrrr, je me suis retrouvée devant un QCM qui m'a un peu fait douter : 

 

Pour l'item E, on parle d'utiliser ecoR1 et BamH1 pour permettre un clonage orienté, en théorie je suis d'accord mais comme il y a deux sites BamH1 , un avant et un après EcoR1, est-ce qu'on peut choisir lequel nous intéresse ? Parce que sinon on ne peut pas réellement être sûr de l'orientation de la séquence dans le plasmide, ou même pire si on coupe aux deux sites BamH1 je pense que ça va bloquer quelque part. Voilà je me demandais ce qui était possible ou pas, j'ai peut être pas compris toutes les subtilités du cours. J'espère que je suis assez claire ! :')

(je précise que dans la correction le E est compté vrai )

[An-Schwann]

30 minutes ago, Ambryon said:

bonjourrrr, je me suis retrouvée devant un QCM qui m'a un peu fait douter : 

 

Pour l'item E, on parle d'utiliser ecoR1 et BamH1 pour permettre un clonage orienté, en théorie je suis d'accord mais comme il y a deux sites BamH1 , un avant et un après EcoR1, est-ce qu'on peut choisir lequel nous intéresse ? Parce que sinon on ne peut pas réellement être sûr de l'orientation de la séquence dans le plasmide, ou même pire si on coupe aux deux sites BamH1 je pense que ça va bloquer quelque part. Voilà je me demandais ce qui était possible ou pas, j'ai peut être pas compris toutes les subtilités du cours. J'espère que je suis assez claire ! :')

(je précise que dans la correction le E est compté vrai )

 je suis d'accord avec toi, il pourrait ce mettre dans deux sens possible, ton raisonnement est bon. On ne pourra pas choisir dans quel sens ça ce met. Puisque il peut se mettre dans deux sens possible, je suis pas sûr qu'on peut bien parler de clonage orienté, malgres le fait qu'on utilise deux enzymes de restriction differente. Ce qui est sûr c'est que c'est un errata, car ça dit ensuite "on obtient un plasmide de 3950 paire de base" c'est une des possibilités, mais on peut obtenir un plasmide plus ou moin grand en fonction de comment de fait la recombinaison lorsqu'on utilise BamH1 et EcoR1. De plus même si on arrivé à le mettre dans le bon sens avec EcoR1 et BamH1, Il resterait un fragment d'ADNc codant la BLG avant que serait transcrit avec donc on pourra pas générer une protéine fonctionnelle 

Le jour de l'examen en général la prof ne pousse pas aussi loin