Analyse de l’ADN qcm

[Hématose]

Salut ! J’arrive pas à mettre en pj les images car elles sont trop volumineuses mais j’avais plusieurs questions par rapport aux plasmides et les recombinants dans le cours de la pr. Couderc ( si vous arrivez à trouver sur sa diapo le plasmide qu’elle utilise et son recombinant ce serait super désolée ) mais du coup si quand on nous dit qu’on coupe avec deux enzymes de restriction et qu’elles ont plusieurs sites de coupes sur le fragment d’ADN qu’on veut prendre est ce que la taille finale du morceau qu’on doit insérer c’est la plus grosse entre le site de coupes le plus proche du début et le site de coupe le plus loin ? Et deuxièmement lorsque qu’on insère le bout d’ADN dans le recombinant et qu’il a plusieurs sites de coupe pour les enzymes de restriction et qu’on nous demande en combien de morceaux est clivé le recombinant si on utilise telle ou telle enzyme est- ce qu’on compte tous les sites de coupe du fragment d’ADN en plus de présent sur le recombinant avant l’ajout de l’ADN ou si deux sites de coupe de la même enzyme se retrouvent côte à côte on n’en compte plus qu’un seul et non deux ? 
c’est absolument pas clair je suis vraiment désolée mais si vous pouviez m’aider svppp merciii

[Lune_]

Salut !

 

Pour ton premier point, je ne vois pas trop de quoi tu parles, mais si j'ai bien compris, je pense que l'enzyme ne vas pas choisir où elle coupe et où elle ne coupe pas. Du moment qu'elle reconnaît son site de restriction alors on aura une coupure. On ne va pas pouvoir choisir non plus quel fragment s'insère (si on en obtient plusieurs après la digestion), donc tout est possible (quelque soit la taille du fragment) tant que les sites sont présents sur le plasmide accepteur. On pourrait voir par contre quels sont les types de plasmides obtenus avec d'autre techniques pour savoir lequel on sélectionne (ex PCR peut-être vous l'avez déjà vu , sinon c'est plus tard dans le cours). En plus ce ne serait pas intéressant d'utiliser une enzyme qui a un site de restriction sur la séquence codante, on ferait plutôt le choix de prendre une autre enzyme qui a des sites autour de la séquence. ça reste un cas que je n'ai pas vu en qcm il me semble...

 

Ensuite pour ta deuxième question, il faut que tu comptes tout les sites de restrictions du recombinant, le mieux c'est de faire un schéma pour mieux visualiser tout les fragments présents sur ton vecteur recombinant. Sachant que si tu as un deux sites BamH1 de part et d'autres de la séquence à intégrer et un seul sur le plasmide accepteur, après clonage il y aura deux sites de restrictions BamH1, celui du vecteur a été coupé en deux pour pouvoir ajouter la séquence où ses sites ont eux aussi été coupés en deux. 

 

Voilà j'espère que j'ai été claire, n'hésite pas si t'as d'autres questions ou si tu as besoin d'une précision !

[An-Schwann]

Salut! 

La réponse de @Lune_ est super complète ! 

Pour arrivé a bien comprendre ce cours je te conseille de faire des QCM pour voir comment ça fonctionne. Une fois que tu sais faire tu verra ça deviens naturel! 

 

Aussi quand les images sont trop grandes pour le forum, je te conseille d'utiliser un hébergeur d'image pour l'insérer. (Par exemple zupimage.net)

Bonne soirée ! 

[Hématose]

Merci

 

 

 

Merci beaucoup c’est très clair ! Une toute dernière question si jamais en qcm on me dit qu’on utilise une enzyme qui a plusieurs sites de restrictions sur mon adn à insérer je considère que c’est le plus grand morceau qui sera inséré sur le recombinant ?  Et merci pour le conseil bonne soirée 

[Lune_]

Dans ce cas là je pense que tu dois considérer le fragment où tu as toute la séquence codante (dans le cas où elle peut exister) vu que c'est qui donnera la protéine d'intérêt, si il manque un bout où le clonage aura servi à rien. En général tu as deux sites de restrictions pour cette enzyme autour de la séquence d'intérêt, ensuite tu intègres dans le vecteur le fragment avec la séquence (ce n'est pas forcément le plus grand). 

[Hématose]

Merci beaucoup !