PCR

[Skalbain]

Bonsoir ! 

 

A quel moment avons nous besoin d'Amorce ARN pour la PCR ou de ligase ? Merci !

QCM 16. Soit I'ADN procaryote suivant comprenant une délétion sur un de ses brins. 5' ACGTTGTGCATGATCG- -ATGACTGTACTGTGCGCGACAAАТ 3' 3' TGCAACACGTACTAGCAGGGTCTGTACGTACTCT TACTGACATGACACGCGCTGTTTA 5' Les chercheurs souhaitent combler la brèche et vont réaliser une synthèse d'ADN in vitro. Ils mettent dans le tube : cet ADN à réparer, l'ADN polymérase I, du dATP dont le phosphate en y est radioactif, du dCTP, du dGTP dont le phosphate en a est radioactif, du dTTP, des sels et de l'eau. Le schéma de la position des phosphates est présenté dans le schéma ci-dessous. Donnez le caractère vrai ou faux de chacune des propositions suivantes: Ο

 

A. Afin d'obtenir un ADN réparé, l'ajout d'une ligase dans le tube est indispensable. B. Afin d'obtenir un ADN réparé, l'ajout d'une amorce d'ARN indispensable. est C. Dans le cas où tous les éléments nécessaires à la réparation figurent dans le tube, l'ADN obtenu sera marqué radioactivement sur des desoxyadénosines phosphate. D. Dans le cas où tous les éléments nécessaires à la réparation figurent dans le tube, I'ADN obtenu sera marqué radioactivement sur des désoxyguanosines phosphate. E. La réaction de synthèse se fera à 72°C.

Par exemple ici ligase primordial mais pas amorce.

"La ligase n’est pas nécessaire à la réalisation d’une RT-PCR." Du td

Cela veut dire pour chaque PCR, nécessité ligase ou bien c'est en fonction du polymerase 1 ou 3 ? MERCI !!!!
 

[Androma]

Salut !

 

Pour savoir  dans quelle situation il y a besoin de ligase ou d'amorce, il faut bien visualiser ce que tu est en train de faire.

 

Lors des PCR, il y a besoin d'amorce mais pas de ligase, car tu réplique juste une partie d'ADN entre 2 amorces, tu n'a donc pas besoin de lier des morceaux d'ADN. Il y a besoin d'une amorce car tu entames un nouveau brin, il faut que l'ADN pol est un point de départ.

 

Dans ce QCM, ce n'est pas une PCR que tu fais mais une réparation simple brin d'ADN. Tu as déjà 2 brins mais 1 est endommagé. Tu n'as donc pas besoin d'amorce car l'ADN pol a déjà un point de départ : le brin d'ADN, mais tu as besoin d'une ligase pour rattacher ton brin. L'ADN pol ne peux synthétiser que de 5' en 3', il lui manque donc la possibilité d'attacher le bout 3' nouvellement synthétisé avec le bout 5' de l'ADN originel.

 

Enfin, lors de la réplication, tu as besoin des 2 car il y a synthèse d'un nouveau brin et nécessité d'attacher des morceaux d'ADN.

 

J'espère que c'est plus clair pour toi !