Techniques

[Skalbain]

Bonsoir !

Comment s'est possible que l'on puisse voir en MO sans coloration les hcromosome métaphysique ds une cellule vivante en division  MAIS  que l'on puisse pas voir les fibroblasttes vivants en culture en MO ???

(et a quois servent les billes d'or colloidal ?) mecri !

Edited Monday at 03:49 PM by Skalbain

[Marcophage]

Salut @Skalbain,

je suis surpris, d'où sort cette affirmation ? les fibroblastes sont visibles au MO.
Les billes d'or colloidal sont très denses et donc très visibles en ME.

Toutes seules, elles servent à rien. On les couples avec des réactifs pour qu'elles se fixent.

 

Bonnes révisions

[axoneme]

Bien sur que les fibroblastes sont visibles en MO, ca sort du cours sur la senescence et mort cellulaire ou on peut y voir des fibroblastes en MO a contraste de phase.

Bonnes révisions

[marilordose]

Coucou @Skalbain,

 

Les chromosomes ne sont pas visibles au microscope optique, ils sont visibles après hybridation in situ avec des techniques de fluorescence comme FISH. De plus, sans coloration les chromosomes sont transparents. 

 

Puis pour les fibroblastes, ils sont visibles au microscope optique sans coloration. Ils peuvent être détectés avec des microscopes à polarisation (à transmission, en contraste de phase, à contraste interférentiel de normasky, ou sur fond noir).

 

Pour les billes d'or colloidales, je confirme ce qu'a dit @Marcophage, elles fixent des anticorps ou des protéines spécifiques afin de détecter la présences de certains éléments dans la cellule, ou simplement leur localisation, tout ça grâce à leur densité qui provoque du contraste au microscope (TEM/MO)

 

J'espère que c'est plus clair comme ça. Bon courage !!

Edited Monday at 05:29 PM by marilordose

[axoneme]

@Skalbain je crois que c’est du à une histoire de contrastes, les chromosomes sont très condensés et ont une indice de réfraction élevé ce qui le rend bien visible en MO. Pour les fibroblastes qui sont très étalés il y a un faible contraste c’est pourquoi on va plutot les observer comme sur le cours de la senescence en MO à contraste de phase !!!

il me semble que c’est ca ! Jespere que c’est clair

il faurait que @Nentiqu valide

Désolé marilordose je n’avais pas encore vu ta réponse !!

[Skalbain]

en M O sans coloration on peut observer les chromosomes métaphasiques dans une cellule Vivante
en division

[marilordose]

Non sans coloration il est impossible de voir les chromosomes au microscope optique, que la cellule soit en division ou non, cela ne change pas. 

[Skalbain]

Vous auriez l'extrait de cours svp, la prépa me dit le contraire

[marilordose]

Je te conseille de lire le poly de td de biocell sur moodle, et particulièrement à partir de la page 21 c'est la partie qui concerne la technique FISH pour visualiser les chromosomes. 

Bonne soirée

[Nentiqu]

Coucou @Skalbain, je valide la réponse de @marilordose, en rajoutant toutefois qu'on peut réussir à observer les chromosomes au microscope optique quand ils sont assez condensés donc durant la métaphase par exemple. Toutefois on observe peu de détails donc c'est pas très pertinent même si ça dépend de ce qu'on recherche.
(photo d'illustration random)

Pour pouvoir observer leur territoire avec plus de précision et lorsqu'ils sont décondensés (même si ça peut se faire dans toutes les phases), on utilisera la méthode FISH qui nous permettra de marquer par fluorescence des territoires spécifiques d'intérêt.
On a également le SKY (Special Karyotyping), un dérivé où on cherchera à marquer chaque chromosome d'une couleur différente via toujours des anticorps, pour observer par exemple facilement des anomalies (translocation etc...)

Quant aux fibroblastes, on peut les observer au microscope optique en contraste de phase, fond noir et au microscope à polarisation et on privilégiera effectivement le MO à contraste de phase @axoneme (car ils sont tous skinny) 

On voit d'ailleurs avec cette image provenant du Polycopié de TD que c'est le contraste de phase qui leur donne le "meilleur" rendu, mais c'est du détail, ce qu'il faut retenir c'est que ça s'observe bel et bien au MO.

En espérant avoir éclairci le débat et en vous souhaitant de bonnes révisions!