l'électrophorèse par autoradiographie

[ussr12345]

bonsoir, est ce que quelqu’un pourrais m’expliquer comment résoudre ce qcm ?mercii bcp 

https://zupimages.net/viewer.php?id=25/49/1qzl.jpeg

[elec]

hello @ussr12345 ! peux tu me dire d'où vient le qcm pour que je puisse aller checker la correction afin d'être sûre de pas te raconter de bétises ?

[ussr12345]

à l’instant, elec a dit :

hello @ussr12345 ! peux tu me dire d'où vient le qcm pour que je puisse aller checker la correction afin d'être sûre de pas te raconter de bétises ?

coucou, c’était sur les poly du tat mais  je vais t’écrire la correction c’est + pratique pour toi! 

QCM 16-ABDE

L'électrophorèse comporte 2 rangées de bandes, celle du bas représente la migration maximale quand l'ADN est seul, celle du haut représente le retardement de l'ADN qui est lié à des protéines. Un trait épais représente une forte quantité d'ADN radioactif et un trait fin représente une faible quantité d'ADN radioactif, s'il n'y a pas de signal sur la rangée du haut cela signifie qu'il n'y a pas d'ADN radioactif retardé donc que celui-ci n'est lié à aucune protéine. Le compétiteur n'est pas marqué donc jamais visible qu'il soit présent ou non !

QCM 17-BE

On voit qu'avec ou sans compétiteur le signal de la bande retardé est identique pour les protéines B et E. Cela signifie que les protéines B et E se lient spécifiquement à l'ADN total car si elles pouvaient aussi se lier au compétiteur, elles se lieraient moins à l'ADN total donc une plus faible quantité serait retardé ce qui engendrerait une baisse du signal autoradiographique (on aurait un trait fin comme pour les protéines A et D qui peuvent se lier sur le DNA total ou sur le compétiteur

[elec]

Bon ça fait 30min que je cherche parce que honnêtement j'ai jamais vu ce type de qcm... Et là je pense que y a un problème sur l'electrophrèse et qu'il y a eu un décallage qui fait que ça ne correspond plus à la correction. 

 

Révélation

@jujéjunum @Émolyse vous en pensez quoi ?

 

Pour expliquer le fonctionnement du retard sur gel :

 

Déjà les lignes de + et de - servent à signal la présence (ou l'absence) du constituant. Donc la ligne DNA total nous signale qu'il y a bien de l'ADN total dans tous les puits. Et la ligne compétiteur nous signale que seulement la moitié droite des puits contient des compétiteurs.

 

Ensuite, en gros on dépose un fragment d'ADN (la même séquence) dans plusieurs puits différents et on va regarder sa migration en électrophorèse. Le puit se trouve généralement du coté - et l'ADN va migrer vers le + (comme il est chargé négativement, il est attiré par le pôle +). Ici, y a rien de précisé mais si je comprends bien on aurait donc le puit en haut et la migration qui se fait du haut vers le bas.

 

La chose à savoir c'est + un fragment est petit et léger, plus il migre rapidement et loin. A l'inverse, plus le fragment sera lourd et moins il migrera loin (=il est "en retard", d'où le nom de la technique). Ici donc, tous les fragments liés à des protéines migreront moins loin (et seront donc plus haut sur notre électrophorèse). Et donc si la protéine ne se lie pas à l'ADN, le fragment migrera normalement sans qu'il y ait de signal plus haut.

Ca c'est pour la partie sans compétiteur (première moitié gauche de l'électrophorèse).

 

Maintenant, si tu rajoutes un compétiteur, alors tout ce qui n'est pas spécifique à l'ADN pourra aussi se lier au compétiteur. Et donc comme les protéines non spécifiques iront aussi se lier au compétiteur, elles se lieront moins à l'ADN, et donc on aura moins de "fragment lourd", ce qui expliquerait une diminution de signal chez les protéines non spécifiques de l'ADN. 

 

Ce qu'il ne faut pas que tu oublies c'est qu'il est bien précisé que c'est l'ADN qui est marqué radioactivement, donc ce qu'on observe sur l'électrophorèse est uniquement l'ADN ! Donc même si on sait que le complexe "protéine/compétiteur" est lourd, il n'apparait pas sur l'électrophorèse parce qu'aucun des éléments qui le constituent ne sont radioactifs.

 

J'espère que tu comprends mieux comment réflechir face à un retard sur gel.

 

Par rapport au QCM en tant que tel, il y a pour moi forcément eu un décallage, car il y un retard sur la colonne 0 (aka celle sans protéine donc avec normalement tout l'ADN qui migre jusqu'en bas, c'est le témoin). Et en plus, on voit une diminution de signal en E alors qu'il n'y a pas de promoteur. Je t'ai refait une électrophorèse qui correspond à la correction (fais pas attention aux points c'est mon logiciel de traitement de texte qui veut rajouter des points dès que je mets un espace) 

 

J'espère que tu comprends mieux, n'hésite pas si tu as d'autres question et bon courage !

 

Edited Saturday at 09:26 PM by elec

[ussr12345]

il y a 40 minutes, elec a dit :

Bon ça fait 30min que je cherche parce que honnêtement j'ai jamais vu ce type de qcm... Et là je pense que y a un problème sur l'electrophrèse et qu'il y a eu un décallage qui fait que ça ne correspond plus à la correction. 

 

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@jujéjunum @Émolyse vous en pensez quoi ?

 

Pour expliquer le fonctionnement du retard sur gel :

 

Déjà les lignes de + et de - servent à signal la présence (ou l'absence) du constituant. Donc la ligne DNA total nous signale qu'il y a bien de l'ADN total dans tous les puits. Et la ligne compétiteur nous signale que seulement la moitié droite des puits contient des compétiteurs.

 

Ensuite, en gros on dépose un fragment d'ADN (la même séquence) dans plusieurs puits différents et on va regarder sa migration en électrophorèse. Le puit se trouve généralement du coté - et l'ADN va migrer vers le + (comme il est chargé négativement, il est attiré par le pôle +). Ici, y a rien de précisé mais si je comprends bien on aurait donc le puit en haut et la migration qui se fait du haut vers le bas.

 

La chose à savoir c'est + un fragment est petit et léger, plus il migre rapidement et loin. A l'inverse, plus le fragment sera lourd et moins il migrera loin (=il est "en retard", d'où le nom de la technique). Ici donc, tous les fragments liés à des protéines migreront moins loin (et seront donc plus haut sur notre électrophorèse). Et donc si la protéine ne se lie pas à l'ADN, le fragment migrera normalement sans qu'il y ait de signal plus haut.

Ca c'est pour la partie sans compétiteur (première moitié gauche de l'électrophorèse).

 

Maintenant, si tu rajoutes un compétiteur, alors tout ce qui n'est pas spécifique à l'ADN pourra aussi se lier au compétiteur. Et donc comme les protéines non spécifiques iront aussi se lier au compétiteur, elles se lieront moins à l'ADN, et donc on aura moins de "fragment lourd", ce qui expliquerait une diminution de signal chez les protéines non spécifiques de l'ADN. 

 

Ce qu'il ne faut pas que tu oublies c'est qu'il est bien précisé que c'est l'ADN qui est marqué radioactivement, donc ce qu'on observe sur l'électrophorèse est uniquement l'ADN ! Donc même si on sait que le complexe "protéine/compétiteur" est lourd, il n'apparait pas sur l'électrophorèse parce qu'aucun des éléments qui le constituent ne sont radioactifs.

 

J'espère que tu comprends mieux comment réflechir face à un retard sur gel.

 

Par rapport au QCM en tant que tel, il y a pour moi forcément eu un décallage, car il y un retard sur la colonne 0 (aka celle sans protéine donc avec normalement tout l'ADN qui migre jusqu'en bas, c'est le témoin). Et en plus, on voit une diminution de signal en E alors qu'il n'y a pas de promoteur. Je t'ai refait une électrophorèse qui correspond à la correction (fais pas attention aux points c'est mon logiciel de traitement de texte qui veut rajouter des points dès que je mets un espace) 

 

J'espère que tu comprends mieux, n'hésite pas si tu as d'autres question et bon courage !

 

okeyyy parfait mercii beaucoup passe une bonne soirée !! 

[Émolyse]

Salut

 

Effectivement @elec, je trouve aussi que l'électrophorèse est assez étrange surtout comme tu dis la colonne 0.

 

@ussr12345 je ne pense pas me tromper quand j'avance que vous n'aurez pas ce genre de qcm à l'examen ou du moins vous l'aurez en beaucoup moins complexe. Le style l'électrophorèse sera plutôt comme celles vu en TD, avec des comparaisons de paires de base par exemple. 

 

Bonne journée