RT-PCR

[inositol]

bonjour, j’ai une question concernant la RT-PCR, est ce qu’elle nécéssite aussi une dénaturation car j’ai compris que c’était un brin d’ARN qui était transcrit en ADN mais après cette transcription est ce que l’ADN subit une PCR classique ou pas car sinon je ne vois pas comment on pourrait détecter la fluorescence car il n’y en aurait pas assez si ? 

Merci ! 

[Lune_]

Salut !

 

Alors effectivement pour faire une RT-PCR on passe de l'ARN à l'ADNc par une reverse transcription, et ensuite tu fais une PCR classique, il y a bien une étape de dénaturation si tu as un ADNc double brin.

Pour la fluorescence, tu la détectes grâce à des agents intercalants, comme le SYBER green, ils se mettent entre les brins pendant la PCR, entre celui qui était déjà présent et celui qui vient d'être synthétisé. Je t'ai mis une diapo du cours de Mme Couderc pour un illustrer (j'espère que tu la vois): tu vois qu'ils émettent de la fluorescence une fois qu'ils sont entre deux brins, ainsi ils marquent la synthèse d'un brin d'ADN par PCR, et donc un cycle. Plus on a fait de cycles plus l'intensité de la fluorescence est grande, ainsi on la détecte qu'à partir d'un certains nombre de cycles de PCR.

Voilàà dis moi si j'ai bien réponds et hésite si t'as d'autres questions !

[inositol]

oui super merci beaucoup !