Pharmaco QCM

[milpoulouc]

Bonjour je n’ai pas bien compris ce qcm ! Les bonnes réponses sont ABD.

On transfecte dans une cellule CHO un système BRET comprenant le récepteur y opiacé couplé à la GFP et sous-unité ai2 couplée à la renilla luciférase. En l'absence de ligand, on observera un signal BRET significatif par rapport à une cellule contrôle dans laquelle le récepteur n'a pas été transfecté:

 

A) Le signal BRET observé traduit l'existence d'un complexe préformé entre la protéine G et le récepteur

B) Le même résultat aurait été obtenu, si à la place de la sous-unité ai2 on avait transfecté la sous-unité aq couplée à la renilla luciférase

C) L'addition d'un ligand agoniste provoquera une diminution du signal mesuré traduisant la dissociation des sous-unités a et By de la protéine G

D) L'addition d'un ligand agoniste inverse du récepteur u opiacé provoque une diminution du signal BRET. On en conclura que le récepteur est constitutivement actif

E) On reproduit l'expérience mais avec un récepteur u modifié avec une suppression de la troisième boucle intracellulaire. Dans ces conditions on continuera à observer un transfert d'énergie mais sans ligand

 

Merci d’avance !

[Quentingent]

Bonsoir, est-ce que je peux savoir de quel poly provient ce qcm pour pouvoir répondre au mieux à ta question ?

 

Bonne soirée et bon courage !!

[Anticorps_loloclonaux]

Coucou petit RCPG en détresse

 

Avant d'attaquer la correction détaillée du QCM : petit rappel sur le système BRET :

- la Renilla luciférase (donneur) émet de la lumière, que la GFP (accepteur) capte si elle est suffisamment proche, puis la GFP ré-émet à une autre longueur d’onde : c’est le signal BRET.

- Plus ces protéines sont éloignées, plus le signal diminue, jusqu’à disparaître (au-delà d’environ 100 Å)

 

Maintenant regardons ce QCM : 

A) VRAI : selon la vision moderne, certains RCPG sont constitutivement actifs = ils sont pré-couplés à la protéine G en l'absence de ligand : RCPG (couplé à GFP) est donc très proche de la protéine G (couplé à renilla luciférase) : les deux protéines sont proches donc le signal BRET est fort 

B) VRAI : à notre niveau, changer la sous-unité alpha-i par une alpha-q n'impacte pas le précouplage du RCPG à la protéine G -> signal BRET fort 

C) FAUX : si on ajoute un ligand agoniste -> la protéine G une fois activée se découple du récepteur, elle s'en éloigne : la distance entre RCPG couplé à GFP et protéine G couplé à renilla luciférase augmente : le signal BRET diminue, ce qui traduit une dissociation du RCPG et de la protéine G 

Remarque : si on avait couplé la sous-unité α à la GFP, et le complexe βγ à la renilla luciférase, le signal BRET aurait diminué, ce qui aurait traduit une dissociation des sous-unités α et du complexe βγ de la protéine G (mais ce n'est pas ce qui a été fait pour cet item) 

D) VRAI : ajouter un ligand agoniste inverse -> découplage, donc éloignement du RCPG et de la protéine G s'ils étaient précouplés (précouplage = récepteur constitutivement actif). Cela se traduit donc par une diminution du signal. 

Remarque : dans cet item, il faut aussi bien vérifier que les agonistes inverse μ opiacés interagissent seulement avec les RCPG couplés à la protéine G dont la sous-unité est αi (c'est bien le cas dans cet item, mais ça aurait pu être un piège )

E) FAUX : la 3e boucle intracellulaire du RCPG est le lieu de fixation de la protéine G. Donc si on la supprime -> le RCPG ne peut pas se coupler à la protéine G : ils sont donc éloignés l'un de l'autre, donc le signal BRET est faible 

 

J'espère avoir répondu à tes questions ! 

N'hésite pas si tu n'as pas compris ;)

 

La pharmaco-bise

[Lilistidine]

donc dès qu’il y a un agoniste le signal baisse ou cela peut être le rôle d’un antagoniste ?

Edited November 16 by Lilistidine
Erreur

[Anticorps_loloclonaux]

Coucou

 

Dans ce système BRET (RCPG couplé à GFP / sous-unité α de la protéine G couplée à Renilla luciférase) : 

- si on ajoute un agoniste : la protéine G une fois activée se détache du RCPG -> le signal BRET diminue 

- si on ajoute un antagoniste neutre : il bloque l'action de l'agoniste, mais ne modifie pas l'activité constitutive du RCPG -> le signal BRET reste fort 

-> si on ajoute certains antagonistes allostériques : modifient la conformation du récepteur et maintiennent une conformation inactive (où RCPG et protéine G sont découplés) -> le signal BRET diminue

-> si on ajoute un agoniste inverse : il découple le RCPG et la protéine G, précouplés au préalable -> le signal BRET diminue

 

Remarque : ces résultats correspondent à ce système BRET, mais si on avait créé un autre système BRET les résultats auraient été différents : si on couple la sous-unité α à la GFP et le complexe βγ à la Renilla luciférase : 

- agoniste : une fois activées, les sous-unités α et βγ se dissocient -> signal BRET diminue

- antagoniste neutre : la protéine G n'est pas activée, donc ses sous-unités restent collées -> signal BRET fort 

- certains antagonistes allostériques : maintiennent une conformation inactive où RCPG et protéine G sont découplés (mais où la protéine G est inactive, donc ses sous-unités sont collées) -> signal BRET fort

- agoniste inverse : découple le RCPG et la protéine G précouplés (la protéine G reste inactive et ses sous-unités sont donc collées) -> signal BRET fort 

 

Pour ce genre de QCM qui est très probable de tomber au concours (en général il y a 1 QCM de pharmacométrie par an), il faut connaître :

- le cycle d'activation du RCPG

- les effets des agonistes, antagonistes, agoniste inverse,

 

En général le QCM interroge sur l'un des deux (ou les deux) systèmes BRET dont je vous parle dans ce message, donc n'hésitez pas à le relire pour dead ça en pharmacométrie

 

Bisous et bon courage

 

[milpoulouc]

Merci pour ta réponse hyper complète !!