Luciférase

[Onadorelapass]

Bonjour la team génome, petite question concernant la Luciférase je n’arrive pas a comprendre ce que c’est et surtout ce qcm me pose problème je pense que je n’ai pas la bonne logique de réflexion… est ce que quelqu’un pourrait me venir en aide svp?? 

Merci pour votre travail :)

 

le qcm en question : 

 

Des analyses génétiques conduisent à isoler une région génomique de 240 pb qui contient une mutation ponctuelle à l’état hétérozygote susceptible d’être responsable de crises d’épilepsie. La mutation se situe à -115pb dans la région promotrice d’un gène exprimé spécifiquement dans les neurones. Afin de tester la conséquence de la mutation sur l’expression du gène, le fragment de 240 pb est cloné dans un plasmide en amont du gène de la luciférase. Le gène de la luciférase est un gène rapporteur. Son produit lui permet d’être observé en laboratoire. Il code pour une protéine qui n’est pas exprimée dans les cellules de mammifères. Sous contrôle du promoteur à étudier, la mesure de l’activité luciférase est un reflet de l’activité du promoteur du gène d’intérêt. Trois plasmides sont finalement obtenus : le premier sans promoteur (plasmide sauvage, S), le second contenant le fragment de 240 pb avec un promoteur normal (N) et le troisième contenant le fragment de 240 pb porteur de la mutation (M) en amont du gène de la luciférase. Les plasmides sont ensuite introduits dans des cellules neuronales et hépatiques. Après 48h de culture, les cellules sont lysées et l’activité luciférase est mesurée. Les résultats obtenus dans les deux types cellulaires sont représentés par des barres blanches ou noires. Les résultats obtenus pour les plasmides S et M ne sont pas significativement différents. Indiquez le caractère vrai ou faux des affirmations suivantes: 

 

 

A. La mutation dans le fragment de 240 pb inhibe l’expression du gène en aval.

 

B. Les barres noires correspondent au tissu neuronal. 

 

C. Les barres blanches correspondent au tissu hépatique.

 

D. La région contenant le nucléotide muté peut lier un facteur de transcription exprimé spécifiquement dans les neurones. 

 

E. L’activité luciférase sur la piste mutée (M) correspond à du parasitage lié à l’expression minimale de la luciférase dans toutes les autres cellules

 

[Dju]

Coucou ! Je pense que ton message n’est pas dans la bonne catégorie :) 

tu ferais mieux de le mettre dans la catégorie de génome !

[Penicilline]

Cc ! 

 

Pour ce genre de QCM il est important de bien comprendre l'énoncé. 

 

Ici on étudie une mutation qui a lieu sur la zone promotrice. 

On a 3 types de promoteur dans cette expérience 

 

- S : pas de promoteur 

- N : promoteur non muté 

- M : promoteur muté 

 

Avec ces infos tu peux répondre à la A

Révélation

Pour moi A : VRAI (pas d'expression du gène en M et la région promotrice ce situe en amont du gène) 

 

Pour la B il faut rechercher les infos dans l'énoncé : 

Révélation

Pour moi B : VRAI " gène exprimé spécifiquement dans les neurones" 

Du coup on peut répondre à la C même si pour qu'il n'y ait pas d'ambiguïté l'item devrait être : "les barres blanches peuvent correspondre au tissu hépatique" 

Révélation

Pour moi C :VRAI

Pour la D : il faut faire appel au cours 

Révélation

Pour moi D : VRAI

 

Pour la E : 

Révélation

Pour moi E : VRAI => même en M l'activité de la luciférase n'est pas significative (presque rien), c'est justement dû l'activité basale du gène 

Comme l'a dit @Dju pour que les autres tuteurs génome voient ton message il faut que tu mettes ton sujet dans la catégorie génome 

Edited November 1 by Penicilline

[Androma]

Salut !

 

Pour t'aider à comprendre un peu plus, je vais essayer de t'expliquer le principe des gènes rapporteurs.

La luciférase est une protéine que l'on peut facilement révéler en laboratoire, et qui n'est pas exprimé par les mammifères, donc elle ne sera produite que si on insère le gène codant pour la luciférase dans le génome. 

 

Ici, on cherche à étudier l'expression d'un gène dans plusieurs cellules, en fonction de la présence d'une mutation sur le promoteur. Comme le promoteur est une région en amont du gène qui régule très fortement son expression, l'hypothèse est que si le promoteur est muté, il y a un changement dans la quantité d'ARNm et de protéines produites. 

 

Comme il peut être difficile d'étudier la quantité d'une protéine en particulier, on utilise les gènes rapporteurs : on va insérer le gène de la luciférase de manière à ce qu'il soit régulé par le promoteur qu'on étudie. Comme ça, l'activité de la Luciférase nous renseigne sur la fonctionnalité du promoteur. La luciférase, elle, on sait facilement la détecter en labo.

 

Prenons l'exemple du QCM : On nous dit que le gène est exprimé spécifiquement dans les neurones. Quand tu regardes la deuxième colonne (N), c'est la colonne avec la construction "normale" (=promoteur non muté + gène + luciférase), tu vois que la luciférase est active dans les neurones mais pas dans les hépatocytes (et donc la protéine associée au promoteur n'est exprimée que dans les neurones). C'est donc bien un promoteur neurone-spécifique. Par contre, quand il est muté (colonne M) tu vois que la luciférase n'est pas active même dans les neurone, et comme on a dit que la luciférase est un gène rapporteur, ça veut dire que le promoteur qu'on étudie, lorsqu'il est muté, ne fonctionne plus, et donc les gènes qui dépendent de ce promoteur ne sont plus exprimés.

 

J'espère que c'est plus clair pour toi, bon courage !

[emma-tie]

@Androma a très bien expliqué(e) le principe d'un gène rapporteur (par ex un gène codant une protéine fluorescente comme la luciférase, la GFP etc…) ; dans notre cas on veut savoir si la mutation inhibe ou pas l'expression du gène dépendant du promoteur en question (gène en aval du promoteur) > gros résumé :

• s'il y a de la fluorescence/activité luciférase => expression du gène 
• s'ił n'y a pas de fluorescence/activité luciférase => inhibition expression 

[jujéjunum]

Coucou, je viens confirmer les super réponses qui t'ont été proposées : j'espère que c'est plus clair pour toi !

Bonne journée et bon courage