BRET, cristallisation

[heaven]

Bonjour,

Sur la plateforme du tutorat les QCM sur la technique de BRET et la cristallisation retombe a fois, or on a pas trop détaillé cette partie dans le cours, je ne sais pas si je dois y accorder beaucoup d'importance ou pas, si c'est le cas est ce que quelqu'un pourrait m'expliquer exactement en quoi ca consiste.

Merciii

[Palamine]

Coucou, dans la théorie si vous n'avez pas abordé ce sujet en classe alors il est préférable de ne pas s'attarder dessus, cependant je sais pas si tu as commencé les annales ou pas mais très souvent il y a au moins quelques items sur la renilla luciférase et la GFP dans le cadre du signal BRET, c'est surtout de la compréhension aussi je pense que par sécurité ça pourrait être pas mal qui tu y accordes quand même un petit peu de temps

La cristallisation que tu évoques tu avais vu ça dans quel chapitre ?

[Palamine]

 

pour ce qui est des explications sur le fonctionnement du signal bret j'ai trouvé ce poste qui en parle

Le 28/04/2021 à 15:36, LaRateATouille a dit :

Salut, j'aurai besoin d'une petite vérification par rapport à la compréhension du système BRET

(update: ce post a été mis à jour, confirmé par la RM, j'espère qu'il vous aidera si cette notion est encore floue) 

 

Il y a 2 cas de figures, différents selon les énoncés:

 

Soit on se situe dans la vision classique → le RCPG n'est pas précouplé avec la protéine G trimérique (αßγ) 

 

Fonctionnement : liaison agoniste-RCPG → Changement de conformation du RCPG → Liaison du RCPG avec la protéine Gα→modification de sa conformation et expulsion du GDP par sous-unité α de la protéine G et fixation de GTP→Activation de la protéine G→Dissociation sous unité α GTP de l’ensemble β-γ
 

Dans cette première version, il y a 2 cas de figures en fonction de ce que l'on marque:

 

• Soit on marque le RCPG et la protéine G
  • Si un agoniste se fixe, il y a augmentation du signal BRET (étant donné que la protéine G se rapproche du RCPG) 
  • Si un antagoniste se fixe, pas de signal BRET car la protéine G ne se rapproche pas du RCPG 
• Soit on marque d'un côté la s-u α et de l'autre la s-u ßγ 
  • Si un agoniste se fixe, il y a diminution du signal BRET (étant donné que les s-u α et ßy se séparent)
  • Si un antagoniste se fixe, le signal BRET reste constant car la protéine G (sous forme trimérique) restera dans sa conformation de base  

 

Soit on se situe dans la vision moderne → le RCPG est précouplé avec la protéine G trimérique (αßγ)

 

Fonctionnement : Pré-couplage entre le RCPG et la protéine G → activité constitutive du RCGP

 

Dans cette deuxième version, il y a 2 cas de figures en fonction de ce que l'on marque:

 

• Soit on marque le RCPG et la protéine G → mesure du couplage de la protéine G et du RCPG 
  • Si un agoniste se fixe → pas de séparation de la protéine G du RCPG → en fonction de la nature de l'agoniste on aura soit un maintient soit une augmentation du signal BRET 
  • Si un agoniste inverse se fixe → séparation de la protéine G du RCPG → diminution du signal BRET  
  • Si un antagoniste se fixe → signal BRET reste identique à l'état de base car pas d'activation du RCPG donc pas de dissociation de la protéine G et du RCPG 
• Soit on marque d'un côté la s-u α et de l'autre la s-u ßγ  → mesure de l'activité de la protéine G 
  • Si un agoniste se fixe → le RCPG et la protéine G restent couplés mais séparation de la s-u ßy de la s-u alpha → éloignement de la s-u α de la s-u ßy → diminution du signal BRET
  • Si un agoniste inverse se fixe → séparation de la s-u α de la protéine G du RCPG → rapprochement des-u α et s-u ßy → augmentation du signal BRET  
  • Si un antagoniste se fixe → signal BRET reste identique à l'état de base car pas d'activation du RCPG 

 

Merci d'avance pour ceux qui prendront le temps de lire le post  

 

@OxyGenS @windu @Tchoupi  

 

n'hésite pas si certains éléments ne te semblent pas clairs, par ailleurs il y a aussi beaucoup de réponses sur le forum qui ont été fournies sur les qcm qui portent sur le sujet jettes y un coup d'œil si tu as du mal sur les QCM ça pourrait vraiment t'aider je pense.