ARN totaux et complexe EF-GTP de la traduction

Maribozyme · October 20

Bonjour, J’aurai deux questions sur les cours de Langin transcription et traduction.

Pour l’analyse des ARN par PCR, à la fin du cours on nous dit que l’on récupère l’ARN dans un culot dans la phase aqueuse après centrifugation et que ensuite on peut rajouter de l’éthanol pour faire des ARN totaux, quelle est la différence entre les ARN récupérés et les ARN totaux ?

Pour, la traduction, est ce qu’il serait possible de m’expliquer le rôle du complexe EF-GTP dans l’élongation ? Je comprends pas trop l’action du GTP ici

Merci

Lénadénine · October 20

Coucou !

En fait concernant l’analyse des ARN par PCR c’est une technique utilisée en génome que je vais essayer de te décrire.
Tu as 2 étapes à ne surtout pas mélanger:

Étape 1: récupération des ARN dans la phase aqueuse:

Lorsque l’on fait l’extraction de l’ARN on utilise un mélange organique qui va nous permettre de séparer les composants de celui ci en 3 phases dans notre tube selon leur polarité et selon la polarité du solvant utilisé:

-phase supérieure: aqueuse qui contient donc les acides nucléiques (notre ARN)

-phase intermédiaire avec des protéines

-phase inférieure avec les lipides.

Donc à ce stade là tu récupères tous les ARN solubles dans la phase aqueuse c’est a dire tous les ARN qui n’ont pas encore précipité donc qui sont sous forme soluble dans le tampon.

Étape 2: Ajout d’éthanol=précipiattion des ARN totaux:

Quand tu ajoutes de l’éthanol tu vas pouvoir précipiter les ARN car ils vont devenir insolubles dans le tampon donc tu vas les récupérer sous forme de culot après centrifugation.

Donc ARN récupérés= ARN en solution dans la phase aqueuse

ARN totaux=ARN précipités de ton culot.

Concernant maintenant le rôle du complexe EF-GTP dans la traduction et notamment dans l’élongation:

EF-GTP c’est un facteur d’élongation GTP-dépendant, il sert à faire avancer le ribosome d’un codon l’ARNm après chaque ajout d’acide aminé. Le GTP ne sert pas à fabriquer la liaison peptidique mais à déplacer le ribosome.

Je vais essayer de t’expliquer un peu le déroulé de la chose:

Après la formation de la liaison peptidique l’ARNt vide est dans le site P, l’ARNt chargé est sur le site A. Là EF-GTP se fixe sur le ribosome et il occupe le site À et donc pousse les ARNt, donc celui du site À va aller au site P, celui du site P vers le site E. Ensuite il y a hydrolyse du GTP en GDP + Pi qui fournit de l’énergie pour ce déplacement donc le ribosome va avancer de 3 bases sur l’ARNm. Et une fois que le GTP est hydrolysé, EF-G-GDP se détache donc le ribosome est prêt à accueillir un nouvel aminoacyl ARNt dans le site À.

Voilà j'espère avoir pu t’aider ! Bon courage !