plasmide électrophorèse analyse

[Bichette81]

Hello, ça fait plusieurs fois que je tombe sur ce genre de qcms et je n'arrive pas à les résoudre, c'est surtout pour les items où il faut voir quel enzyme nous permet de savoir si le plasmide est recombinant ou pas. si qnn pourrait m'aider ;) 

c'est le qcm de la session 1 2022/2023

[PetiteComète]

Hello @Bichette81, j'avais répondu à ce qcm ici, je t'invite à le lire 

 

 

Neshites pas à me dire si c'est pas clair

 

[Bichette81]

ah c'est génial ce que tu as fais merci bcp !

juste je n'ai pas compris pourquoi l'item C est faux dans le qcm 3, par rapport au sens d'insertion

[PetiteComète]

En effet j'ai l'impression que ma réponse n'etait pas complete, je te refais ca ici et jirais modifier mon ancienne reponse aussi en fonction 

Edited March 20 by PetiteComète

[PetiteComète]

Donc Item C - QCM 3 - Session 1 - 2022/2023 : 

 

Donc pour ce qui est de ce qui t'ai demandé à savoir si cette digestion par BamH1 et Hind3 te permet de différencier les 2 sens d'insertions. 

Je vais dans un premier temps te détailler les deux options et leur numérotation pour que tu comprennes mais ceci n'est pas obligatoire le jour de l'examen et tu peux directement voir en visualisant que c'est faux.

 

Ton gène B de base, (numérotation sur le plasmide B) : BamH1 390 puis Hind3 440 puis BamH1  990

Une fois que tu as digéré tes deux plasmide par BamH1 : ton insert a une nouvelle numérotation : BamH1 0 puis Hind3 50 (440 - 390) puis BamH1 600

Tu insert ce gène et tu as ainsi crée ton plasmide recombinant (jusque là ok) et tu as deux options pour le sens d'insertion du gene au niveau du site BamH1 850pb :

 

OPTION 1 : BamH1 850 => BamH1 0 => Hind3 50 => Bam H1 600 (on est d'accord que les deux premier BamH1 fusionne, c'est juste pour que tu puisse visualiser.)

OPTION 2 : BamH1 850 => BamH1 600 => Hind3 50 => Bam H1 0 (pareil fusion des deux premier BamH1) . 

=> en gros dans un cas le site Hind3 est loin du site BamH1 (option 2)  et dans l'autre cas il en est proche (option 1) 

 

Ce que je viens d'écrire au dessus est incohérent en terme de numérotation, ainsi puisque on est dans le plasmide recombinant, il faut introduire une nouvelle numérotation : 

 

OPTION 1 : BamH1 850  => Hind3 900 => Bam H1 1450                                          (850 + 600 = 1450) 

OPTION 2 : BamH1 850 => Hind3 1400 => Bam H1 1450                                        (850 + 550 = 1400)

 

Maintenant que ceci est fait, tu as normalement compris et visualisé (même pas besoin de passer par tout ce que j'ai cité au dessus, tu peux direct arriver ici) ; donc on digère le plasmide recombinant par Hind3 et BamH1 : 

On a 2 sites BamH1 (puisque on a ouvert notre plasmide A) 

On a 2 sites Hind3 (l'un venant du plasmide A (site à 1860pb) et lautre du plasmide B)  

Dans l'ordre, c'est site sont placé comme suivant : 

BamH1 850 - Hind3 (option 1 ou option 2)  - BamH1 1450  - Hind3 2460

Qu'importe le sens d'insertions, si tu coupes en tous ces endroits, tu obtiendras les mêmes morceaux à la fin, donc impossible de savoir le sens d'insertions ! 

 

 

Dis moi si c'est plus clair pour toi et merci d'avoir souligné mon oubli  

Edited March 21 by PetiteComète

[Bichette81]

C’est super mercii ! j’ai presque tout compris mis à part le fragment de 550 dans la parenthèse je vois pas trop d’où il vient mdrr, sinon j’ai compris le principe

[PetiteComète]

Je m'en suis doutée

 

Alors, tu as : 

OPTION 2 : BamH1 850 => BamH1 600 => Hind3 50 => Bam H1 0 

Etaprs de la nouvelle numerotation : 

Fusion de 850 et 600 (car le 600 devient 0) => donc on garde 850pb

BamH1 0 devient 850 + 600 (car c'est l'extrémité de l'insertion qui fait 600pb) donc 1450pb

Ici Hind3 est plus proche du 0 que du 600, donc sa nouvelle numerotation est : 0 /550 /600. 550 car entre 0 et 50 il y a 50 mais donc si ce n'est pas 0 mais 600, tu as toujours une distance de 50, ainsi 600-50 = 550

Ça setait sur linsert, une fois dans le plasmide recombinanat, on a : 550 + 850 = 1400 ! 
Ainsi tu obtiens : 

OPTION 2 : BamH1 850 => Hind3 1400 => Bam H1 1450                                

 

Dis moi si c'est plus clair 

[Bichette81]

ah ça va mieux merci beaucoup !

 

Et sans vouloir trop abuser de tes superbes explications, est-ce que tu pourrais m'aider avec le même type de qcm pour la session deux de 2024, j'ai jeter un coup d'oeil a la correction mais je m'emmêle un peu avec tous les chiffres, et surtout je pensais que la synthèse ne pouvait pas se faire quand on a deux promoteurs différents, ici procaryote et eucaryote, je pense que je mélange des choses ...

merci beaucoup ;)

 

[bêta-arezkin]

Bonjour 

Alors pour le promoteur il n'y a pas de problème étant donné qu'on coup avec hind3 et donc qu'on ne prends que le gène sans le promoteur et on le place dans B sous la dépendance du même promoteur que l'autre gène. 

Pour les chiffres je te conseille de faire un dessin et de te représenter les résultats des différentes recombinaisons et coupures et ça sera nettement plus clair.

Ps : si tu fais ça environ 5 à 8 fois tu sera capable de te faire ta propre manière de résonner et d'aller beaucoup plus vite même sans dessin