Volume mort et Charge dans le chromatogramme

[ZB6]

Coucouu, j'espère que vous allez bien et que vos révisions avancent bien.

 

Moi, je bloque sur une question un peu bête concernant les chromatographies et les chromatogrammes ; en voici deux : le premier concerne les chromatographies en général (échangeuses d'ions, d'exclusion, d'affinité...) et le deuxième une chromatographie d'exclusion.

 

1- 

 

2-

 

J'ai fait un qcm disant qu'on ne pouvait pas calculer le volume mort V0 au niveau de la zone 1. J'arrive pas à savoir comment calculer le volume mort si on nous donne une chromatographie d'affinité sachant que le volume mort en chromatographie d'affinité correspond au volume de phase mobile nécessaire pour éliminer les molécules non spécifiques, avant que la molécule d’intérêt ne soit élue sous des conditions spécifiques. Est-ce que le volume mort est celui qui vient juste après le palier, avant l'étape d'élution ?

 

Ensuite, même question pour la charge : selon moi, il y a toujours une phase dans la chromatographie qu'on arrive à voir dans le chromatographe, qui correspond à la charge de l'échantillon, moment où l’échantillon est injecté dans la colonne et que les molécules se fixent à la phase stationnaire. 

J'arrive clairement à voir la charge dans le deuxième chromatogramme (faut vraiment être aveugle pour pas voir écris en grand comme ça) mais dans le premier chromatogramme, l'item disant que la partie 1 correspondait à la charge de l'échantillon était compté faux.  Donc, est-ce que la charge de l'échantillon dans une chromatographie d'affinité est apparente dans le chromatogramme ?

 

Je sais si j'ai été claire, breeef, merci bcpp et bon courage à tous <3

[ArnAud100]

Salut !

 

1) Pour ce qui est du volume mort (V₀) en chromatographie d’affinité :

En chromatographie d’affinité, le volume mort correspond au volume de phase mobile nécessaire pour éliminer les molécules qui ne se lient pas à la phase stationnaire comme tu l'as bien dit. Ce volume est généralement équivalent au volume d’exclusion, soit le volume qui s’écoule avant que la molécule d’intérêt ne soit éluée sous des conditions spécifiques.

 

Donc pour la question : Est-ce que le volume mort correspond à la zone juste après le palier, avant l’étape d’élution spécifique ?

Oui, exactement ! En chromatographie d’affinité, après l’injection de l’échantillon, les molécules non spécifiques passent directement à travers la colonne sans interagir avec la phase stationnaire. Le volume nécessaire pour les éliminer est le volume mort (V₀), et c’est bien celui qui précède l’étape où les molécules d’intérêt sont éluées avec un tampon spécifique. Ce volume peut être déterminé par l’apparition du premier pic correspondant aux molécules non fixées.

Dans le premier chromatogramme, le volume mort se situe bien avant la phase d’élution spécifique (le pic étroit après le palier).

 

2) La charge de l’échantillon est-elle visible sur le chromatogramme ?

Je trouve bizarre que l'item ait été compté faux pour le premier chromatogramme (chromatographie d'affinité), je pense que c'est une erreur. La zone 1 est censée représenter la charge de l'échantillon, la zone 2 le début de l'élution, et la zone 3 en haut du pic les protéines purifiées/éluées. La charge de l'échantillon s'observe toujours sur un chromatogramme.

Pour le deuxième graphique qui montre une chromatographie d'exclusion là pas de doute en effet mdr.

 

Bon courage à toi !

 

 

[ZB6]

Oui, jtrouvais ça aussi plutôt bizarre. En tout cas, tes explications sont vraiment claires. Merci beaucoup !