Aide urgente QCM UE11

[noidonthaveagun]

Bonjour ! 

Est-ce que quelqu'un pourrait me donner une correction détaillée de ces QCM, avec les explications car je ne comprends pas tout surtout l'item E du 2e. Merci !!

 

1 : https://ibb.co/VYZm3VJW

2 : https://ibb.co/MyGRSM3F

3 : https://ibb.co/3KKyCx2

 

Avec ce support : https://ibb.co/mVhxXKZ1

[PetiteComète]

Coucou, 

 

Alors numéro 1, tu peux trouver la réponse ici :  

 

Edited March 18 by PetiteComète

[PetiteComète]

Numéro 2  : QCM 2 - UE11 - SESSION 1 - 2021/2022

 

 

ITEM A
Le plasmide a contient un promoteur cellules endothéliales spécifique, c'est donc bien un promoteur tissu spécifique
Le plasmide B contient deux gènes 1 et 2 sous la dépendance d'aucun promoteur (cf item B)
Enfin, le plasmide C est obtenue après digestion des plasmides A et B par HinD3, et c'est bien un plasmide dans lequel tu vas retrouver les gènes 1 et 2 sous la dépendance d'un promoteur tissu spécifique. Car c'était le but de la manip !.

ITEM B
Tu vas ici me regarder que le plasmide B. Tu constates que tu as les gènes 1 et 2 et que en amont de ses gènes tu n'as pas de promoteur. En effet le premier promoteur en amont serait le promoteur du gène de résistance à la G418 mais il est suivi d'un Terminateur donc l'effet de ce promoteur s'arrête à ce niveau. Tu n'as donc pas de promoteur en amont de ton gène, donc pas de transcription, (et pas de traduction)

ITEM C
Tu digères ici tes plasmide A et B avec une seule enzyme hind3. Qui dit une seule enzyme dit que chacun des bouts de tes gènes seront identiques, donc tu auras un clonage non orienté (il faut que ce soit super clair pour vous !!!)

ITEM D
Ton gène de résistance au G418 est précédé par un promoteur eucaryote, or, on transfecte des BACTÉRIES donc c'est faux !! (ça aussi ça tombe tout le temps, si vous avez un doute n'hésitez pas  ) 

ITEM E
-L'amorce 1 se fixe au promoteur cellule endoT spécifique. On le retrouve dans le plasmide A et dans le plasmide C
-L'amorce 3 se fixe au site IRES entre les 2 gènes. On retrouve ce site dans le plasmide B et le plasmide C

Les deux amorces peuvent bien fonctionner ensemble (donc OK pour PCR) => cf cours 
Il n'y a que dans une seule situation que les 2 amorces sont toutes 2 fixées à un même plasmide : le plasmide C.
Donc si une PCR se fait au niveau d'une cellule, ça veut dire que les amorces se sont fixées, donc que les 2 séquences sont bien présentes, donc que tu as bien des bactéries transformées par le plasmide C.

 

Je te rédige la numéro 3 en ce moment même, elle arrive bientot 

Edited March 18 by PetiteComète

[noidonthaveagun]

@PetiteComète Je suis vraiment désolée mais je n'ai toujours pas compris pourquoi la E est vraie 

[PetiteComète]

Je vais réessayer de t'expliquer haha, mais dans le cas ou c'est toujours pas clair je t'invite à venir en perm après demain soir (jeudi), ce sera plus simple de t'expliquer. J'ai remis des couleurs dans ma réponse d'au dessus, peut etre que ce sera plus clair !!

 

Donc pour reprendre l'item : on te demande si les amorces 1 et 3 peuvent etre utilisées pour déterminer si une bactérie porte le plasmide C. 

Ceci suppose que tu avais une bactérie lambda, tu l'as transformée avec un plasmide, mais les plasmides sont si petit que tu ne sais pas trop si tu as donné à ta bactérie le plasmide C, ou bien le A ou bien le B. Tu voudrais savoir lequel tu as transformé dans ta bactérie. 

Pour cela tu possèdes des amorces (ou sondes), se sont des petites suite de nucléotides qui vont s'hybrider/se fixer de façon SPECIFIQUE sur certaines zones. 

Une fois fixées, si toutes les conditions sont remplies (tu les as vu dans ton cours), une genre de transcription va se faire permettant la synthèse de fragments double brin. 

Donc si tu as une synthèse c'est que les amorces se sont fixées et a que donc la séquence spécifique des ses amorces est présentes (c'est le point essentiel à retenir, vraiment !) 

 

Comme je te l'ai détaillé juste avant : 

-L'amorce 1 se fixe au promoteur cellule endoT spécifique. Ce promoteur, on le retrouve dans le plasmide A et dans le plasmide C

-L'amorce 3 se fixe au site IRES entre les 2 gènes. On retrouve ce site dans le plasmide B et le plasmide C

 

* Donc dans ton plasmide C tu as : un site IRES et un promoteur cellule endoT spécifique. Donc les deux amorces 1 et 3 peuvent s'hybrider. Si elles peuvent s'hybrider alors elle donneront un résultats en RT PCR 

 

* Par exemple : i tu n'as pas le plasmide C mais le plasmide B par exemple, tu as un site IRES mais pas de promoteur cellule endoT spécifique. Donc l'amorce 1 ne peut pas se ficer et l'amorce 3 peut se fixer. Ainsi si un plasmode C présent dans ta bacterie, que tu ajoutes les amorces 1 et 3 et que tu fais une RT PCR, tu n'auras rien car tu n'auras pas les 2 amorces !! 

 

J'espère que c'est plus clair...

 

Numéro 3  : QCM 3 - UE11 - SESSION 1 - 2021/2022

 

ITEM A : 

Comme vu plus haut le plasmide c'est code bien pour un gène de résistance à la G418, ce gène est sous la dépendance d'un promoteur eucaryote, ici on te parle bien de cellules porcines donc tout va bien. 

 

Pour la suite, je te conseille de poser : 

Amorce 1 s'hybride avec Promoteur présent sur PLA et PLC 

Amorce 2 s'hybride avec Gene 1 présent sur PLB et PLC 

Amorce 3 s'hybride avec IRES présent sur PLB et PLC 

Amorce 4 s'hybride avec Gene 2 présent sur PLB et PLC 

 

ITEM B : 

 

La lignée 1 A donné des résultats (pas la peine de s'attarder sur lesquels, même si en soit oui c'est important mais pas pour cet item)

Pourquoi ? 

Car la ligné 2 n'a donné aucun résultats, donc à chaque fois que un couple d'amorce a été utilisé, une des deux amorces ou bien les deux n'ont pas pu s'hybrider. Puisque tu ne peux pas savoir lesquels parmi les couples d'amorces utilisées, tu ne peux pas conclure.

Donc on ne peut pas affirmer que ce qui est dit dans l'item est vrai, donc c'est par défaut FAUX.

 

ITEM C : 

Tu ne regardes que la lignée 1, tu vois que tu as des résultats en B et en C donc que les amorces 2, 3 et 4 se fixent : puisque les amorces 2 et 4 se fixent respectivement sur les gène 1 et 2, tu en déduit qu'ils sont présents et que donc tu as bien présence du gene 1. Pas la peine daller plus loin, l'item est faux.

 

ITEM D : 

L'électroporation est bien une des technique =s qui vous a été présentée en cours pour la transfection.

 

ITEM E :

Si on veut savoir si un gène est présent, la RT PCR est une technique de choix : on sélectionne des amorces spécifiques de ta séquence et on voit si on obtient un résultat (signifiant si oui ou non l'amorce s'est hybridée) 

 

Voila, j'espère que tout ceci est plus clair pour toi, 

Bon courage 

Et n'hésite pas à venir en permanence pour poser tes questions !!

Edited March 18 by PetiteComète

[noidonthaveagun]

Merci beaucoup @PetiteComète ! C'est beaucoup plus clair je pense pouvoir réussir la prochaine fois que j'aurais affaire à ce type de QCM !!