Sequençage sanger

[Celia_que]

hello !

une petite question m'est venue suite à un item d'annales de pass demandant s'il y avait besoin d'une taq polymérase pour réaliser le séquençage selon sanger. j'ai bien répondu que non, mais après réflexion je me suis dit que c'était pas si évident que ça parce que pour le séquençage sanger il faut bien dénaturer les deux brins comme la première étape de la pcr non ? et sachant que ça correspond à l'étape de la pcr à plus haute T°C, il faut bien chauffer pour dénaturer les brins pou rle séquençage sanger non ? mon raisonnement et que du coup pour sanger après avoir chauffé pour dénaturer on abaisse la température du coup quand l'adn polymérase synthétise de l'adn il n'y a plus de haute T°C donc pas besoin que ce soit une taq, alors que pour la pcr l'élongation continue à se faire à haute T°C donc besoin d'une Taq. Est-ce que c'est ça l'explication ou pas du tout ?

merci :))

[Ellstar]

helooo,

alors j'espère que je dirais pas de bêtises, non tu n'as pas besoin de taq polymérase ni de dénaturation, enfaite tu fais une simple réplication de l'ADN mais comme tu rajoute des ddXTP tu bloque de temps en temps la réplication pour les brins, en en mettant la quantité nécessaire tu obtiendra don au moins un brin s'arrêtant à chaque nucléotide du gène que tu étudie, mais du coup u n'as pas besoin de taq polymérase

j'espère avoir répondu à ta question et que c'est plus claire pour toi,

les tuteurs n'hésitez pas a me corriger, j'ai du mal avec toute les enzymes ^^'

bon courage !!

[mathi.asparagine]

Il y a 3 heures, Celia_que a dit :

une petite question m'est venue suite à un item d'annales de pass

Salut c'est le raisonnement de @Ellstar qui est le bon ici. En effet tu n'as pas besoin de dénaturer ni donc de chauffer -> taq polymérase inutile.