Techniques UE8 recherche aide/pièges

[Pkahhhh]

Salut
Je galère parfois à bien différencier certaines techniques comme le Western Blot, Dot Blot, SDS-PAGE,(y'a que Elisa où relativement je me trompe pas), immunoprécipitation, agglutination, etc je sais à quoi ils correspondent mais parfois je me trompe quand même en exo parce que parfois j'ai du mal à faire le lien avec le théorique et le concret.

Si quelqu'un pouvait me faire un petit récap des différences et surtout des pièges à éviter pour chaque technique, ce serait super utile  Si vous avez des astuces ou des erreurs classiques à partager, je dis pas non

Merci d’avance vous êtes les boss que vous pensez être sur ce tutoforum

Edited March 13 by Pkahhhh

[An-Schwann]

Salut  

je vais faire ça un par un 

western blot, le plus important c’est que c’est dénaturante, à faire attention dans les Annalyse de technique d’étude de prot (c’est pas UE8 mais je le mentionne) et ducoup on peut utilisé uniquement des Ac utilisé contre de epitope séquentiel 

dot blot, puisque c’est non dénaturant, on peux utiliser des ac dirigé contre des epitope séquentielle ou conformationnelle les deux fonctionne 

westen Blot et dot Blot c’est des technique de marquage ça sert à démontrer qu’une protéine et présente dans un extrait, mais ça ne démontre pas les interaction entre protéine!!!

[ju.gulaire]

Coucouuuu les pièges que je vois souvent c'est par rapport à ce tableau

Globalement y a des items qui mélangent les techniques et leur rôle +++, après le classique c'est savoir qu'est ce qui est fait en conditions dénaturantes ou pas (SDS page qui casse les ponts disulfures par ex), et le Western Blot qui étudie les protéines et rien d'autre

J'espère que ça t'aidera !

[An-Schwann]

Immunoprecipitation, il faut faire attention au condition, ça ne fonction que si les Ac et les AG sont solubles, si on le couplé à la turbidimetrie ou la nepholometrie, on peux lutiliseR pour faire des dosage 

 

Et les pièges qui peuvent tomber Pour immunoagglutination: d’abord vérifier que l’Ag est bien insoluble (si il est soluble on fait des immunoprecipitation) et aussi vérifier l’Ac qui doit être un IgM

[Pkahhhh]

Merci vous êtes mes sauveurs @An-Schwann et @ju.gulaire !! Le recap m'a bien permis de me faire un rappel et merci pour le tableau il est top

Si j'ai bien compris, on peut déterminer une interaction avec d'autres protéines pour:

- La coimmunoprécipitation (d'ailleurs on peut le faire aussi en immunoprécipitation ou faut que ce soit en co?)

- Le pull-down

 

(y'en a d'autres ??)

Merci d'avance 

[An-Schwann]

5 minutes ago, Pkahhhh said:

Merci vous êtes mes sauveurs @An-Schwann et @ju.gulaire !! Le recap m'a bien permis de me faire un rappel et merci pour le tableau il est top

Si j'ai bien compris, on peut déterminer une interaction avec d'autres protéines pour:

- La coimmunoprécipitation (d'ailleurs on peut le faire aussi en immunoprécipitation ou faut que ce soit en co?)

- Le pull-down

 

(y'en a d'autres ??)

Merci d'avance 

C’est ça il dans mon cours c’est bien  précisé coimmunoprecipitation pour les interaction mais jsp si les prof attendent qu’on aye tant en détail et que si ils font le raccourci de juste immunoprecipitation t’en pense quoi @ju.gulaire

[ju.gulaire]

18 minutes ago, An-Schwann said:

C’est ça il dans mon cours c’est bien  précisé coimmunoprecipitation pour les interaction mais jsp si les prof attendent qu’on aye tant en détail et que si ils font le raccourci de juste immunoprecipitation t’en pense quoi @ju.gulaire

ouaip dans le cours d'immuno c'est la co-immunoprécipitation et dans le cours d'étude des protéines elle parle d'immunoprécipitation mais d'après moi c'est la même chose juste il prend en compte fait qu'il y a du surnageant à la fin dans le cours d'immuno

T'embêtes pas sur le fait qu'il ait "co" ou pas

Les tuteurs n'hésitez pas à me corriger !

[MohDonto]

il y a 33 minutes, ju.gulaire a dit :

ouaip dans le cours d'immuno c'est la co-immunoprécipitation et dans le cours d'étude des protéines elle parle d'immunoprécipitation mais d'après moi c'est la même chose juste il prend en compte fait qu'il y a du surnageant à la fin dans le cours d'immuno

T'embêtes pas sur le fait qu'il ait "co" ou pas

Les tuteurs n'hésitez pas à me corriger !

 

il y a 55 minutes, An-Schwann a dit :

C’est ça il dans mon cours c’est bien  précisé coimmunoprecipitation pour les interaction mais jsp si les prof attendent qu’on aye tant en détail et que si ils font le raccourci de juste immunoprecipitation t’en pense quoi @ju.gulaire

 

Oui dans l'idée ils ne vous piègeront pas sur la différence entre les 2 mots sachant qu'en plus la différence se trouve entre deux cours d'UE différentes. 

 

Si vous voulez le détail, les deux techniques fonctionnent sur le même principe, simplement en fonction de l'objectif, on va utiliser un nom ou l'autre.

- Si on cherche seulement à repérer une protéine cible pour étudier son expression par exemple, on parle d'immunoprécipitation.

- Si on cherche à faire précipiter une protéine ainsi que les autres protéines à laquelle elle est liée pour étudier les interactions protéine-protéine, on parle de co-immunoprécipitation. Et c'est d'ailleurs écrit dans le titre du schéma dans la diapo "Exemple d'application de la précipitation en milieu liquide" du prof.

 

Mais bon, la Co-IP est une extension de l'IP et c'est vraiment pas un détail important sur lequel s'attarder. :)