SDS-PAGE & état oligomérique des protéines : monomère ou dimère ?

[Chicoco]

Bonsoir, 

Lorsqu’on analyse une protéine par SDS-PAGE et Western Blot, sous quelles conditions peut-on la retrouver sous forme monomérique ou dimérique ? Si une protéine existe sous forme monomérique en solution, est-ce qu’elle apparaîtra forcément sous forme dimérique en SDS-PAGE dénaturant, sauf si elle est stabilisée par des ponts disulfures ? (par ex: on a un PM de 80 kD est-ce qu'il passe à 160 kD?)

Et en gel filtration, est-ce que cette même protéine pourrait être détectée sous forme dimérique?

Je sais pas si vous voyez ce que je veux dire

Merci pour votre aide

[dzinthesky]

Il y a 1 heure, Chicoco a dit :

Lorsqu’on analyse une protéine par SDS-PAGE et Western Blot, sous quelles conditions peut-on la retrouver sous forme monomérique ou dimérique ? Si une protéine existe sous forme monomérique en solution, est-ce qu’elle apparaîtra forcément sous forme dimérique en SDS-PAGE dénaturant, sauf si elle est stabilisée par des ponts disulfures ? (par ex: on a un PM de 80 kD est-ce qu'il passe à 160 kD?)

Coucou, si j'ai bien compris ta question, dans le cas où ta protéine avec un PM de 80kDa en solution : 

• SDS Page + agent réducteur (qui dénature la protéine par rupture des ponts disulfures) : si ta protéine apparaît dimérique c’est qu'elle est stabilisée par des ponts disulfure, t'auras alors 2 bandes de 40kDa. 
• SDS Page + agent réducteur : si ta protéine dimérique n'est pas stabilisée par des ponts bisulfures t'auras toujours ta bande de 80kDa.

Il y a 1 heure, Chicoco a dit :

Et en gel filtration, est-ce que cette même protéine pourrait être détectée sous forme dimérique?

Si tu connais le PM de ta protéine, tu peux regarder si elle est éluée pour un PM plus grand qu'elle est détectée sous forme d'oligomères par exemple.

 

Est-ce que j’ai bien répondu à ta question?

Bon courage !!

[Chicoco]

Il y a 8 heures, dzinthesky a dit :

Est-ce que j’ai bien répondu à ta question?

Oui merci !

Il y a 8 heures, dzinthesky a dit :

Coucou, si j'ai bien compris ta question, dans le cas où ta protéine avec un PM de 80kDa en solution : 

• SDS Page + agent réducteur (qui dénature la protéine par rupture des ponts disulfures) : si ta protéine apparaît dimérique c’est qu'elle est stabilisée par des ponts disulfure, t'auras alors 2 bandes de 40kDa. 
• SDS Page + agent réducteur : si ta protéine dimérique n'est pas stabilisée par des ponts bisulfures t'auras toujours ta bande de 80kDa.

Ici tu as fait le cas où la on part d'un dimère ou d'un monomère ?

Parce que si on part d'un monomère je pensais que si on lisait 80 kD en SDS Page, en forme dimérique on aurait qqch de 160 kD et je me demandais si c'était la même chose pour le gel de filtration

 

Désolé j'ai un peu de mal avec ça, merci d'avance !

[dzinthesky]

Il y a 6 heures, Chicoco a dit :

Ici tu as fait le cas où la on part d'un dimère ou d'un monomère ?

D'une protéine dimérique, en mode elle possède 2 sous-unités reliées entre elles par un pont disulfure. C'est pour ça que quand tu fais un SDS Page + agent réducteur tu vas rompre les ponts disulfures et obtenir 2 sous-unités de 40kDa.

C'est plus clair?

[Chicoco]

Ok c'est bon merci bcp !