Annale 2020-21, UE11 QCM 2 et 3

[PauliNébuline]

Salut!

L'item 2B est vrai. Il n'y a pas besoin des 2 amorces?

L'item 3B est vrai. Pourquoi on utilise une RT-PCR ici et pas une PCR?

Merci!!!

Edited March 10 by PauliNébuline

[An-Schwann]

Salut, une PCR permettrai juste de vérifier que l'ADN à été intégré, une RT-PCT a d'abord une étape de reverse transcriptase, donc ça part de l'ARN donc je vais te donner des scénario 

1er: 

Ton plasmide a était intégré mais les cellules ne l'exprime pas (pour diverses raisons) 

Si on fait une PCR: on vera juste que le plasmide a était intégré 

Si on fait une RT-PCT: on détectera pas D'ARN d'intérêt donc on pourra en conclure que le gène n'est pas exprimé 

2eme scenario 

Le plasmide a était intégré, et les cellules l'exprime bien 

On fait une PCR: on verra que le plasmide à etait intégré 

On fait une RT-PCR: on observera de l'ARN d'intérêt, donc on pourra en conclure que les gènes est bien exprimé 

Donc ici en gros on fais un RT-PCR car on vérifie l'expression du plasmide et pas juste son intégration

J'espère que c'est claire !

 

[Nentiqu]

Coucou, c'est extrêmement vicieux mais l'ADNc c'est pour complémentaire, donc simple brin, donc une seule amorce suffit (oui c'est pas très sportif comme moov, je serai tombé dedans aussi)  
Pour le QCM 3 item B, c'est parce qu'on veut savoir si les cellules expriment donc si elles produisent l'ARNm, d'où l'intérêt d'une RT qui donnera l'ADN de base (comme sur notre plasmide) qu'on pourra ensuite amplifier s'il est présent pour montrer sa présence (ou pas).

Bon courage!

[PauliNébuline]

il y a 3 minutes, Nentiqu a dit :

Coucou, c'est extrêmement vicieux mais l'ADNc c'est pour complémentaire, donc simple brin, donc une seule amorce suffit (oui c'est pas très sportif comme moov, je serai tombé dedans aussi)  

C'est sadique!!!

 

Par contre je n'ai pas compris pour la RT-PCR

[Nentiqu]

il y a 2 minutes, PauliNébuline a dit :

C'est sadique!!!

 

Par contre je n'ai pas compris pour la RT-PCR

Dans une RT PCR tu fais une PCR en utilisant de l'ARN comme base de départ donc comme a dit @An-Schwann tu peux prouver l'expression ou non de l'ARN, car si ta RT PCR fonctionne c'est qu'elle a trouvé l'ARN nécessaire. Alors qu'avec une PCR classique tu vas amplifier un morceau de ton plasmide, ce qui peut indiquer s'il est recombinant ou non, mais tu n'as pas le certitude qu'il y a une transcription en ARN.
J'espère avoir été plus clair

Edited March 10 by Nentiqu

[PauliNébuline]

il y a 3 minutes, Nentiqu a dit :

Dans une RT PCR tu fais une PCR en utilisant de l'ARN comme base de départ donc comme a dit @An-Schwann tu peux prouver l'expression ou non de l'ARN, car si ta RT PCR fonctionne c'est qu'elle a trouvé l'ARN nécessaire. Alors qu'avec une PCR classique tu vas amplifier un morceau de ton plasmide, ce qui peut indiquer s'il est recombinant ou non, mais tu n'as pas le certitude qu'il y a une transcription en ARN.
J'espère avoir été plus clair

Oui c'est plus clair merci!