Immunoprécipitation

[Laketsialogie]

Bonjour, j'ai dû mal à comprendre comment l'immunoprécipitation permet de purifier une protéine. Pourrai-je avoir une explication svp ?

[Chicoco]

Salut

L’immunoprécipitation est une technique non dénaturante utilisée pour isoler une protéine spécifique d’un mélange complexe en utilisant un anticorps dirigé contre cette protéine. Elle repose sur une intéraction spécifique entre l’anticorps et la protéine cible, qui est ensuite capturée avec des billes magnétiques ou d’agarose. Après des lavages pour éliminer les impuretés, la protéine est élue et peut être analysée par Western Blot puis qu'elle est non dénaturante.

Ex concret:

Si on veut isoler la protéine p53 d'un lysat cellulaire, on utilise un anticorps anti-p53, qui se fixe spécifiquement à la protéine. On capture ce complexe avec des billes recouvertes de protéine A/G et, après lavage, on récupère p53 pour l'analyser

J'espère que c'est clair !

[PetiteComète]

Hello ! 


Alors il ya différentes technique d'immuniprécipitation, je vais détailler la plus claire selon moi : 


Tu as une cellule, tu la lyse, ainsi ta protéine d'intérêt est mélangée à plein d'autres éléments. 

Pour l'isoler tu vas ajouter à ton lysat cellulaire un Ancticorps spécifique de ta protéine. 

Donc tu as une liaison (direct ou indirect) entre Ac et protéine.

Ceci ne suffit pas à isoler ta protéine, tu vas ajouter une bille magnétique, une bille dagarose, une protéine A... bref un élément qui est énorme et qui va se fixer à la partie constante de ton anticorps.

Aisni tu as une liaison : bille-   Ac - protéine

Ceci étant très gros et encombrant, tu vas pouvoir le faire précipiter et donc récupérer ces 3 éléments, donc tu Isoles ta protéine !! 


J'espère que c'est plus clair !

[Laketsialogie]

@PetiteComète @Chicoco Oui, c'est plus clair maintenant. Je vous remercie !