Pkahhhh Posted March 7 Posted March 7 Coucou Dans la technique de Western Blot, les protéines sont d’abord déposées sur un gel d’électrophorèse, donc si en CCM on nous demande la taille des protéines, c'est faux car c'est en Dot Blot qu’on peut les énumérer ? C'est ça ? Aussi je comprends pas comment lire le graphique et par conséquent j'arrive pas vrm à répondre aux dernières questions du TD d'UE8, si vous pouviez m'aider ce serait géniaaaaalissime https://ibb.co/pvVdrMw1 https://ibb.co/BVD4VVdQ Merci d'avance Quote
Solution ArnAud100 Posted March 7 Solution Posted March 7 Salut ! 1) Pour ce qui est de ta première question, non justement ça serait vrai car dans la technique de Western Blot, les protéines sont d'abord séparées sur un gel d'électrophorèse en fonction de leur taille/poids moléculaire (généralement via SDS-PAGE). Ensuite, elles sont transférées sur une membrane et détectées par des anticorps spécifiques. Le Western Blot permet donc bien d'évaluer la taille des protéines en comparant leur migration à un marqueur de poids moléculaire. Par contre, le Dot Blot est une technique plus simple qui permet uniquement de détecter la présence ou l'absence d'une protéine, sans information sur la taille ni le nombre, en déposant directement des gouttes de l’échantillon sur une membrane, sans passer par une séparation sur un gel d’électrophorèse. Donc il est moins précis que le Western Blot. 2) Ensuite pour ta question sur le graphique tu n’arrives pas à comprendre la figure B c’est bien ça ? Ce graphique est un diagramme de cytométrie en flux qui montre l’expression de CD69 (un marqueur d’activation des lymphocytes dont les lymphocytes T CD4+) en présence ou en absence d’un traitement anti-TNF. Déjà il faut comprendre les axes du graphique : • Axe horizontal (FITC) → Marquage des lymphocytes T CD4+ avec un anticorps anti-CD4 couplé à un fluorochrome vert (FITC). • Axe vertical (PE) → Marquage des lymphocytes activés avec un anticorps anti-CD69 couplé à un fluorochrome rouge (PE). Donc à partir de cela on peut diviser le graphique en 4 quadrants : • Bas gauche (FITC-, PE-) : cellules non CD4+ et non activées. • Bas droit (FITC+, PE-) : lymphocytes CD4+ mais non activés (CD69-). • Haut gauche (FITC-, PE+) : cellules activées (CD69+), mais non CD4+. • Haut droit (FITC+, PE+) : lymphocytes CD4+ activés (CD69+). S’ajoute à ça le fait qu’on ait 2 graphiques sur la figure B : - Celui du haut SANS Anti-TNF • 40 % des cellules sont CD4+ activées (quadrant haut droit). • 30 % sont CD4+ mais non activées (quadrant bas droit). - Celui du bas AVEC Anti-TNF • Seulement 15 % des cellules sont CD4+ activées (quadrant haut droit). • 55 % sont CD4+ mais non activées (quadrant bas droit). Pour finir on peut interpréter les résultats : L’ajout d’un anti-TNF réduit l’activation des lymphocytes T CD4+, ce qui est visible par la diminution du pourcentage de cellules dans le quadrant haut droit (CD4+ CD69+). Cela signifie que le TNF joue un rôle important dans l’activation des lymphocytes T, et que son inhibition réduit cette activation. En espérant avoir répondu à tes questions, Bon courage ! Loïstamine, Fodiliaque, Pkahhhh and 1 other 1 1 2 Quote
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