orientation de l'insert

[ichigo]

Bonjour, j'ai du mal à comprendre comment on fait pour déterminer l'orientation de l'insert. Apparemment ct nécessaire pour l'item 2 de l'examen blanc mais je l'ai pas compris dans l'ensemble non plus, si vous voulez bien m'aider.

[Batman_sans_Robin]

Salut @ichigo !

 

J'ai repris les qcms de l'EB et j'ai fait le schéma du plasmide qu'on doit obtenir :

 

En bleu c'est les enzymes de restrictions du plasmide BAP et en jaune celui de BIP. *HindII = 3700

 

Pour savoir si c'est dans le bon sens, tu vois qu'entre Nco1 et hindIII tu as soit 200 bp soit 150 bp. 

Ici j'ai mis le gène dans le bon sens donc tu as 200 bp entre Nco1 et HindIII. 

Si il était à l'envers (donc Nco1 1600 du côté de Nco1 1200) t'aurais 150 bp avant HindIII. 

 

Du coup sur le graphique tu regardes à H, c'est à dire digestion par HindIII. À la base il était à 3700 bp, mais on a rajouté le gène max donc 3700 + 350 = 4050.

HindIII lui est à 1200 + 200 = 1400 bp.

 

Si on digère par HindIII ce plasmide : 4050 - 1400 = 2650 bp.

 

Donc si le plasmide est dans le bon sens, on obtient un fragment de 2650 bp (ce qu'il y a entre les 2 HindIII) et un autre fragment de 5750 - 2650 = 3100 bp.

 

Ce qui correspond à PL3 sur le schéma. C'est pourquoi c'est le seul utilisable, car le seul plasmide où le gène max est inséré dans le bon sens.

 

J'espère que les calculs sont clairs et la méthode aussi  n'hésite pas si besoin !

Edited March 1, 2025 by Batman_sans_Robin

[ichigo]

@Batman_sans_Robin coucouuu c'est super ce que t'as fait je te remercie!!