Tuteur Batman_sans_Robin Posted March 1 Tuteur Posted March 1 Bien le bonjour à vous, Je sollicite votre aide pour ces qcms : - https://ibb.co/20NFd5sk -> Je n'arrive à résoudre l'item D, il y a qu'un seul xho1 donc je comprends comment on obtient un fragment de 5850 ? - https://ibb.co/Q3SKW4TP -> compté vrai, mais je suis pas sûre de comprendre - https://ibb.co/svLrnXKr -> je comprends pas pourquoi il est faux D'ailleurs je crois qu'il manque une image pour résoudre qcm 15 Bien à vous, Batman (: Loïstamine 1 Quote
Responsable Matière An-Schwann Posted March 1 Responsable Matière Posted March 1 9 minutes ago, Batman_sans_Robin said: Bien le bonjour à vous, Je sollicite votre aide pour ces qcms : - https://ibb.co/20NFd5sk -> Je n'arrive à résoudre l'item D, il y a qu'un seul xho1 donc je comprends comment on obtient un fragment de 5850 ? - https://ibb.co/Q3SKW4TP -> compté vrai, mais je suis pas sûre de comprendre - https://ibb.co/svLrnXKr -> je comprends pas pourquoi il est faux D'ailleurs je crois qu'il manque une image pour résoudre qcm 15 Bien à vous, Batman (: Salut ! le premier je pense que c’est un errata, je vois pas comment c’est possible aussi le deuxième, il faut bien différencier thérapie génique, et transgenese, dans la thérapie génique, on prélève des cellules (souvant des patient) pour modifier le gènes d’intérêt, et le re injecter au patient, un exemple c’est dans le cours de bêta thalassemie où on prélever des cellules souches hématopoïétiques pour les modifier et les réinjecter au patient ici seulement les cellule transférer, et leur descendance (cellule sainguin) si ta besoin un autre exemple, il y en a un autre dans le cours que je maîtrise moin bien avec les CAR T cells La transgenese elle, modifie le zygote, donc toute les cellules de l’organisme qui va naître de celui ci portera la modification pour la troisième, les antibiotiques permettront d’isoler uniquement les bactérie qui ont intégré le plasmide, sans savoir si ils ont intégré un rencombinant ou non recombinant je prend l’exemple de lexo de ta première question, on peux voire que le plasmide, qu’ils soit recombinant ou pas, présente les gène à la résistance, est ce que c’est claire? Batman_sans_Robin, Loïstamine and Fodiliaque 1 2 Quote
Tuteur Batman_sans_Robin Posted March 1 Author Tuteur Posted March 1 il y a 5 minutes, An-Schwann a dit : rencombinant ou non recombinant Merci ! Mais c'est quoi la différence ? S'il est pas recombinant c'est qu'il n'est pas dans le bon sens ? Quote
Responsable Matière An-Schwann Posted March 1 Responsable Matière Posted March 1 4 minutes ago, Batman_sans_Robin said: Merci ! Mais c'est quoi la différence ? S'il est pas recombinant c'est qu'il n'est pas dans le bon sens ? Les non recombinants veut dire que l’insertion du segment qu’on voulait rajouté, n’a pas marché et que le plasmide c’est refermé sur lui même la prof avait précisé aussi que les taux de réussite pour cela est faible, d’où la raison qu’on veux vérifier qu’il est recombinant ou pas,´par exemple par une pcr Quote
Tuteur Batman_sans_Robin Posted March 1 Author Tuteur Posted March 1 (edited) il y a 5 minutes, An-Schwann a dit : Les non recombinants veut dire que l’insertion du segment qu’on voulait rajouté, n’a pas marché et que le plasmide c’est refermé sur lui même la prof avait précisé aussi que les taux de réussite pour cela est faible, d’où la raison qu’on veux vérifier qu’il est recombinant ou pas,´par exemple par une pcr D'accord mais du coup je comprends pas pourquoi l'item est faux, pour moi c'est la même chose @Rhomolium merci ! Je suis trop bête Edited March 1 by Batman_sans_Robin Quote
Rhomolium Posted March 1 Posted March 1 (edited) il y a 39 minutes, Batman_sans_Robin a dit : - https://ibb.co/20NFd5sk -> Je n'arrive à résoudre l'item D, il y a qu'un seul xho1 donc je comprends comment on obtient un fragment de 5850 ? Pour cet item on te parle du plasmide recombinant donc la première coupure avec BamH1 et Pst1 a été faite sur plasmide donneur et receveur : sur pProm : 1500-800=700 pb sur plasminine : 1350-1300= 50pb -> 5200pb -50pb=5150 pb Plasmide recombinant : 5150 + 700 = 5850 pb Sur ce plasmide tu vois qu’il y a qu’un site Xho1 donc pour la coupure tu aura un fragment de 5850 pb (le plasmide qui est circulaire et après cette coupure linéaire) voilà j’espère que c’est plus clair. Edited March 1 by Rhomolium Batman_sans_Robin, An-Schwann, Nentiqu and 1 other 2 2 Quote
Rhomolium Posted March 1 Posted March 1 (edited) @Batman_sans_Robin Un plasmide recombinant, c’est le plasmide qui a reçu la séquence d’intérêt, cette séquence peut se mettre dans 2 sens (je te joints la diapo du cours) Un plasmide non recombinant, à l’inverse n’a pas reçu la séquence, lors de la coupure il s’est refermé sur lui même, c’est donc notre plasmide receveur. https://ibb.co/Rk4mwDmK Du coup si la séquence est présente et qu’on a un clonage non orienté tu as deux sens d’insertions : - un dans le bon sens où tu pourras faire la transcription et la traduction via l’ajout d’une enzyme pour le vérifier - un autre où la traduction ne se fera pas car la séquence est dans le mauvais sens Pour finir, si tu ajoute ton antibiotique tu aura la connaissance de tes plasmides recombinant dans le bon sens. Il pourront te servir pour distinguer le sens l’insertion de la séquence et non si elle est présente ou pas. J’espère que c’est plus clair et que j’ai pas dis des bêtises. Sinon je laisse les tuteurs mieux t’expliquer. Edited March 1 by Rhomolium Loïstamine and Fodiliaque 1 1 Quote
Tuteur Batman_sans_Robin Posted March 1 Author Tuteur Posted March 1 il y a 33 minutes, Rhomolium a dit : @Batman_sans_Robin Un plasmide recombinant, c’est le plasmide qui a reçu la séquence d’intérêt, cette séquence peut se mettre dans 2 sens (je te joints la diapo du cours) Un plasmide non recombinant, à l’inverse n’a pas reçu la séquence, lors de la coupure il s’est refermé sur lui même, c’est donc notre plasmide receveur. https://ibb.co/Rk4mwDmK Du coup si la séquence est présente et qu’on a un clonage non orienté tu as deux sens d’insertions : - un dans le bon sens où tu pourras faire la transcription et la traduction via l’ajout d’une enzyme pour le vérifier - un autre où la traduction ne se fera pas car la séquence est dans le mauvais sens Pour finir, si tu ajoute ton antibiotique tu aura la connaissance de tes plasmides recombinant dans le bon sens. Il pourront te servir pour distinguer le sens l’insertion de la séquence et non si elle est présente ou pas. J’espère que c’est plus clair et que j’ai pas dis des bêtises. Sinon je laisse les tuteurs mieux t’expliquer. Je crois j'ai compris : en fait c'est que l'item précise recombinant, alors que le gène de résistance nous permet de savoir si la bactérie l'a ingéré ou non, mais pas de savoir si il est dans le bon sens, donc on peut pas savoir si c'es recombinant ou pas. C'est ça ? Quote
Rhomolium Posted March 1 Posted March 1 il y a 3 minutes, Batman_sans_Robin a dit : Je crois j'ai compris : en fait c'est que l'item précise recombinant, alors que le gène de résistance nous permet de savoir si la bactérie l'a ingéré ou non, mais pas de savoir si il est dans le bon sens, donc on peut pas savoir si c'es recombinant ou pas. C'est ça ? Je crois que c’est un truc comme ça Si on reprend l’item : https://ibb.co/svLrnXKr Si on obtient une protéine qui résiste à l’antibiotique ça veut dire que cette protéine vient d’un plasmide qui a pu faire la traduction, c’est donc le plasmide recombinant où la séquence d’intérêt et dans le bon sens. Par contre si on une autre protéine et que quand on lui balance des ATB elle meurt c’est que le gène de résistance et pas présent donc cette protéine vient de l’autre plasmide recombinant ou du plasmide non recombinant (mais je suppose que quand on fait ce type de recherche on a préalablement à trouver ceux qui sont recombinant dans le bon sens donc les plasmides non recombinant on déjà étaient écartés via une coupure enzymatique) Révélation Je pense que tu peux attendre la réponse d’un tuteur. Je suis un peu parti loin je crois Batman_sans_Robin 1 Quote
Responsable Matière Solution An-Schwann Posted March 1 Responsable Matière Solution Posted March 1 1 minute ago, Rhomolium said: Je crois que c’est un truc comme ça Si on reprend l’item : https://ibb.co/svLrnXKr Si on obtient une protéine qui résiste à l’antibiotique ça veut dire que cette protéine vient d’un plasmide qui a pu faire la traduction, c’est donc le plasmide recombinant où la séquence d’intérêt et dans le bon sens. Par contre si on une autre protéine et que quand on lui balance des ATB elle meurt c’est que le gène de résistance et pas présent donc cette protéine vient de l’autre plasmide recombinant ou du plasmide non recombinant (mais je suppose que quand on fait ce type de recherche on a préalablement à trouver ceux qui sont recombinant dans le bon sens donc les plasmides non recombinant on déjà étaient écartés via une coupure enzymatique) Reveal hidden contents Je pense que tu peux attendre la réponse d’un tuteur. Je suis un peu parti loin je crois 17 minutes ago, Batman_sans_Robin said: Je crois j'ai compris : en fait c'est que l'item précise recombinant, alors que le gène de résistance nous permet de savoir si la bactérie l'a ingéré ou non, mais pas de savoir si il est dans le bon sens, donc on peut pas savoir si c'es recombinant ou pas. C'est ça ? Oui, presque https://ibb.co/20NFd5sk je reprend ton image ici, on essaye de mettre le promoteur devant une séquence codante pour un gène d’intérêt ici, or quand on fais cela le taux de réussite est pas 100% c’est à dire on en aura qui auront intégré la séquence d’intérêt, ici le promoteur tissu spécifique, cela peux se faire dans le bon ou mauvais sens, dans ces deux options, on aura un plasmide recombinant qui aura: promoteur + ANDc des gènes qui nous intéresse + gènes codant une protéine d’antibioresistance (ici kanamycine) D’autre part, tu aura aussi des des plasmide non recombinant , donc qui auront pas la séquence qu’on essayer d’ajouter, dans ce cas, on a : l’ADNc codant notre gène d’intérêt (sans le promoteur) et encore le gène d’antibioresistance Quand l’ essaye de faire un clonage non orienté, on aura c’est 3 plasmide, on donne ces 3 plasmide à des bactéries, mais les bactérie n’intègre pas toujours les gènes dans leur génome, ducoup maintenant on a des bactérie, que je vais numéroter pour faciliter bacterie 1: à intégré le plasmide recombinant bactérie 2: à intégré le plasmide non recombinant bactérie 3: n’a pas intégré le plasmide recombinant ou recombinants comme on a dis précédemment, le plasmide recombinant et le non recombinant exprime le gène d'antibioresistance, donc quand on met ces bactéries dans un environnement où il y l’antibiotique, la bactérie 1 et 2 vont survivre et la 3 va mourir Maintenant que j’ai illustrer cela, revenant à la question, ducoup la présence de gène d’antibioresistance dans les plasmides ne permet pas de déterminer les plasmides recombinant vs les non recombinants, ça permet uniquement de savoir quel bactérie on intégré un plasmide, et qui l’exprime Dis moi si c’est toujours pas claire! Loïstamine, Fodiliaque and Batman_sans_Robin 1 2 Quote
Tuteur Batman_sans_Robin Posted March 2 Author Tuteur Posted March 2 @Rhomolium @An-Schwann merci à vous 2 !! An-Schwann and Fodiliaque 2 Quote
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