Ancien du Bureau ChloéCazard Posted November 14, 2016 Ancien du Bureau Posted November 14, 2016 Bonjour ! Je n'ai pas bien compris les diapos 218 et 219. Pour la 218, c'est le 3ème schéma qui me perturbe : il représente le début de la séquence codante, mais il y a l'étiquette... Donc ça veut dire que ce schéma représente la séquence une fois insérée dans le plasmide ? Et l'ATG qui suit le site SgfI, elle sert à quoi exactement ? Est-ce que dans la séquence "protein-coding region" il y a aussi un ATG ? Et après dans la diapo 219, il y a deux ATG. Je voulais juste vérifier que le premier est bien celui déjà présent de base dans le vecteur pour l'étiquette (et donc non représentée dans la diapo 218) et que le second ATG était celui dont on nous parle dans la diapo 218. Voilà c'est un peu confus mais j'espère que vous pourrez m'aider ^^ Merci d'avance !
Solution VM-Varga Posted November 15, 2016 Solution Posted November 15, 2016 Hello Chloé, Pour la 218, c'est le 3ème schéma qui me perturbe : il représente le début de la séquence codante, mais il y a l'étiquette... Donc ça veut dire que ce schéma représente la séquence une fois insérée dans le plasmide ? C'est tout à fait ça ! On remarque d'ailleurs que l'étiquette est bien suivie des nucléotides de rallonge permettant de "faire croire" aux endonucléases qu'elles coupent bien à l'intérieur d'un brin en 5' de l'amorce. Et l'ATG qui suit le site SgfI, elle sert à quoi exactement ? Est-ce que dans la séquence "protein-coding region" il y a aussi un ATG ? C'est le codon initiateur de ta protéine d'intérêt intégré via l'amorce, il n'y a donc pas d'ATG dans ta protein-coding region. En effet, il est inutile dans les premières diapo (étant en phase avec l'ATG de l'étiquette). Il te sera utile par la suite, lorsque tu auras isolé ta protéine et que tu auras supprimé l'étiquette, en vue d'intégrer la protéine in vivo. Car s'il n'y avait que l'ATG de l'étiquette, tu aurais été obligé d'intégrer cette dernière dans l'organisme pour traduire la protéine, avec un risque de déclencher une réaction immunitaire (pas bon pour le Monsieur ou la Madame), mais grâce au deuxième ATG, t'as protéine d'intérêt pourra être traduite sans l'aide d'une séquence annexe en 5'. En espérant t'avoir éclairé
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