leo907853 Posted November 8, 2016 Share Posted November 8, 2016 es ce que quelque un pourrait m'expliquer le western blot ? ainsi que la question 4 du concours de janvier 2012 ? merci d'avance Link to comment Share on other sites More sharing options...
Solution Gazouillis Posted November 9, 2016 Solution Share Posted November 9, 2016 Coucou Léo ! Désolée pour la réponse tardive ! Alors tout d'abord pour le western blot : On l'appelle aussi immuno-empreinte, il a pour objectif de connaître l'identité précise d'une protéine, détectée à partir de son anticorps spécifique. Pour cette technique, on a besoin d'un support fin, c'est pourquoi on ne peut pas utiliser le gel de polyacrylamide qui agirait comme une sorte "d'éponge" en diluant l'Ac, on utilise donc la feuille de nitrocellulose. Pour commencer, on fait migrer la protéine sur le gel polyacrylamide (à ce stade on connaît donc sa taille et son poids). Puis, on réalise un électrotransfert depuis le gel de polyacrylamide vers la feuille de nitrocellulose (qui va accepter/capter les protéines). Pour cela, on utilise 2 feuilles de papier filtre hydrosalin conductible, une sur le gel et une sous la feuille de nitrocellulose ("sandwich" entre le complexe gel/nitrocellulose) ainsi qu'une anode sous le complexe et une cathode au dessus. Le tout étant à pH alcalin pour forcer un transfert vers l'anode (et donc vers la feuille de nitrocellulose). Une fois le courant mis en tension on transfert les protéines sur la feuille de nitrocellulose. La feuille de nitrocellulose comporte déjà des standards de masse moléculaire. Pour éviter de saturer cette feuille en protéines (vu qu'elle va toutes les accepter pendant le transfert), on va saturer tous les sites non spécifiques avec du lait en poudre ou de l'albumine, de cette façon on limite le "bruit". Après cette étape, on met la feuille en présence d'Ac contre la protéine d'intérêt (Ac obtenus à partir de souris immunisées par exemple). On met cette fixation d'Ac en évidence en utilisant un deuxième Ac dirigé contre le fragment Fc de la première immunoglobuline (spécifique d'espèce). Puis on réalise une conjugaison covalente de l'Ac2 contre une enzyme (transformation substrat incolore en produit coloré rouge). Cette réaction colorée met en évidence la protéine recherchée, c'est une méthode semi quantitative Pour le QCM 4 du concours de janvier 2012 : On te dit qu'on suspecte le patient d'etre atteint de la maladie de Kahler caractérisée par la secretion d'un SEUL type d'Ig Toi ce que tu sais de ton cours c'est qu'un Ig est composé de 2 chaines lourdes (γ) et 2 chaines legeres (κ OU λ -> soit tu as 2 κ soit 2 λ) Donc : A- Vrai : il faut ici remarquer que tu as par rapport au controle une augmentation des chaines γ et λ. Donc tu en deduis que le clone tumoral produit un Ig de type γ2λ2 B- Faux : le clone tumoral ne produit qu'un type d'Ig ! Et dans une Ig on a 2 chaines legeres identiques (ici λ) C- Faux : on voit qu'il y a des chaines κ ca signifie qu'il y a aussi des Ig de type γ2κ2 dans le plasma mais qui ne sont pas produites par le clone tumoral. D- Faux : les chaines légères restent entières (les chaines lourdes sont fragmentées) E- Vrai : 1 fragment Fc + 2 Fab. Avec les 2 Fab qui peuvent reconnaître chacun l'Ag. En espérant que j'ai résolu ton problème Bon courage !! Link to comment Share on other sites More sharing options...
leo907853 Posted November 22, 2016 Author Share Posted November 22, 2016 merci Link to comment Share on other sites More sharing options...
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