chromatographie échangeuse d'ion

[chapeau]

Salut, j'ai besoin d'une clarification car sur mon cour, celui du prof, avec les exos et les corrections je suis perdu à propos de la chromatographie échangeuse d'ions, on a :

+ pH=pI -

OU

- pH=pI +

Merci !

[jlr.10]

Salut @chapeau ! 

 

Alors si tu parle bien de cette diapo : 

 

 

Il faut bien comprendre déjà le principe de la chromatographie, de manière simplifiée c'est une phase stationnaire = la colonne et une phase mobile = la solution qui passe dans la colonne et qui contient potentiellement ta protéine d'intérêt.  Une chromatographie échangeuse d'ions est une chormatogrpaie qui va te permettre de séparer ta protéine d'intérêt en fonction de sa charge positive (+) ou négative moins (-) :

• il faut savoir que les charges contraires s'attire c'est à dire le + est attiré par le - et inversement 
• la charge d'une protéine dépend du pH de la solution où elle se trouve 
• le pI = point isoélectrique d'une protéine est le pH (de la solution où se trouve la protéine) pour lequel la protéine est neutre, c'est à dire qu'elle porte autant de charges positives que de charge négatives.
• le pI diffère d'un type de protéine à l'autre. 
• si le pH de la solution est < au pI de la protéine alors celle-ci sera globalement chargée positivement (plus précisément la protéine portera plus de charges positive que négative) 
• si le pH de la solution est > au pI de la protéine alors celle-ci sera globalement chargée négativement (plus précisément, elle portera plus de charge négative que positives )

Ainsi pour faire une chromatographie échangeuse d'ion il faut connaitre le pI de ta protéine d'intérêt, ainsi que le pH de la solution dans laquelle elle se trouve pour choisir la bonne phase stationnaire. 

Exemple :

• la pI de ma protéine d'intérêt est de 5 
• le pH de la solution (phase mobile) dans laquelle ma protéine se trouve est de 8
• ainsi le pI < pH --> je sais alors que dans cette solution ma protéine d'intérêt est chargée globalement positivement 
• je vais donc utilisé une phase stationnaire chargée négativement comme le CM (les contraires s'attirent donc le positif s'accroche sur le négatif) 
• je suis alors entrain de réalisé une chromatographie échangeuse de cations. 
• lorsque je verse la phase mobile (ma solution contenant la protéine d'intérêt) à travers la phase stationnaire toutes les protéines chargée positivement vont s'accroché à la phase stationnaire, pour être sur que seule ma protéine s'accroche il faudra modifier progressivement le pH de la phase mobile afin de faire en sorte que seulement ma protéine d'intérêt soit positive dans toute la solution (mais ça je ne sais pas si la prof la détaillé). 

 

J'espère que c'est plus claire, n'hésite pas si tu as d'autres questions ! Bon courage !