lubellule Posted November 5, 2016 Posted November 5, 2016 Bonjour, Je ne comprends pas pourquoi l'item C du QCM3 CONCOURS 2011 est faux... Quelqu'un pourrait m'éclairer s'il vous plait ? Merci !!
Solution Gwendoline_sabat Posted November 7, 2016 Solution Posted November 7, 2016 Salut !Alors, dans ce QCM tu vois que :- Le fragment d’intérêt est coupé d'un côté par AccI et de l'autre par EcoRI- Le MCS du plasmide contient DANS L'ORDRE D'APPARITION : ClaI, BamHI, KpnI, EcoRI, XhoI, AccI et XbaILa première chose qui doit te sauter aux yeux est le fait que AccI dans le plasmide se trouve derrière EcoRI, ce qui t'empêchera, si tu coupe le plasmide également par ces deux enzymes d’insérer le fragment dans le bon sens (le bon sens étant celui mettant le point +1 du côté du ATG de la luciférase).Comme tu as vu cela tu cherches maintenant parmi les sites en amont de EcoRI lequel est compatible avec AccI, le prof ne te laisse pas vraiment le choix puisqu'il te propose TaqI, non présent sur les sites et complétement incompatible vu la longueur de son site, et ClaI qui est bien présent en amont de EcoRI. Il te reste alors a savoir si ClaI est bien compatible avec AccI.AccI : GT------CGAC ClaI : AT------CGAT -------------> GTCGAT : La compatibilité est vérifiée ! CAGC-----TG TAGC------TA CAGCTA Maintenant répondons aux questions...A : VRAI, le produit coupé par AccI et EcoRI pourra être inséré dans le bon sens (à condition que le plasmide soit digéré par ClaI - ou s'hybridera l'extrémité compatible libérée par AccI - et EcoRI).B : FAUX, TaqI donne des fragments trop courts qui ne pourront s'hybriderC : FAUX, si tu digère le plasmide par AccI et EcoRI alors le fragment s'insèrera du mauvais sens, le point +1 ne sera pas orienté vers le ATG de la luciférase.D : VRAI, c'est effectivement la solution, ClaI étant a la fois en amont de EcoRI et complémentaire de AccI cette enzyme permettra l'insertion dans le bon sens du fragment.E : FAUX, toujours le même problème avec TaqI.
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