B thalassemie

[Pala.off]

Bonjour est ce que vous pouvez m’expliquer cette diapo svp je n’ai pas trop compris chaque partie colorée et aussi pk on va en sens inverse du LCR? 
https://ibb.co/gFrfLYnx

merci 

[MohDonto]

  On 1/30/2025 at 11:32 AM, Pala.off said:

Bonjour est ce que vous pouvez m’expliquer cette diapo svp je n’ai pas trop compris chaque partie colorée et aussi pk on va en sens inverse du LCR? 
https://ibb.co/gFrfLYnx

merci 

Expand  

 

Salut !

C'est vrai qu'il y a pas mal d'infos, on va essayer de parler de tout 1 par 1  !

 

Pour commencer, il faut comprendre ce que l'on fait :

 

-> ici on a construit un vecteur lentiviral dans le but de traiter une ß-thalassémie chez un patient. Ce vecteur sera intégré dans le génome d'une cellule productrice qui va produire des particules virales. Ensuite, on va prélever les cellules souches hématopoïétiques du patient et les infecter par ces particules virales. Ainsi, elles pourront exprimer une version fonctionnelle du gène codant pour la ß-globine adulte. La finalité, c'est que les cellules sanguines différenciées à partir de ces cellules souches qu'on aura replacer dans la moelle osseuse du patient après une chimiothérapie (pour supprimer les cellules souches avec le gène défectueux) puissent produire une ß-globine fonctionnelle.

 

Voici le schéma du cours qui résume ce que je viens d'expliquer :

https://ibb.co/qwJq0fD

 

Maintenant on peut essayer de comprendre le schéma :

- En violet, tu as le transgène qui est la version fonctionnelle du gène codant pour la ß-globine

- En jaune, tu as un promoteur (P) pour initier la transcription et un enhancer (E) qui la favorise (dans la séquence enhancer, il y a des séquences d'introns qui ont été ajoutées pour le rendre encore plus efficace, si tu ne comprends pas pourquoi, c'est pas grave, retiens simplement leur but d'amélioration d'efficacité).

- En bleu, tu as des séquences qui stoppent soit la traduction, soit la transcription et qui permettent de contrôler plus précisément l'expression du trasngène. En gros, ça permet que seulement ton transgène soit exprimé et non pas les séquences qui sont à côté et qui pourraient interférer avec ce processus.

- En vert, tu as les séquences LTR et virales :

-> Les séquences LTR(Long Terminal Repeats) permettent l'intégration efficace du vecteur dans le génome de la cellule cible et sa stabilité. C'est des séquences répétées aux extrémités du génome viral, elles ont un rôle avec des enzymes qui vont permettre que ton vecteur puisse être mis dans l'ADN des cellules où tu veux le mettre.

-> Séquences virales, elles servent à la production de particules virales.

 

Pour ta dernière question :

 

La séquence LTR possède des séquences d'épissage, si jamais on le laisse dans le même sens que le transgène, il y a des risques qu'il se retrouve supprimé suite à un épissage non désiré. C'est pour ça qu'on le met à l'envers par rapport à la séquence LTR. C'est comme si mettait du texte à l'envers, le programme de lecture ne pourrait pas le lire donc il ne va pas le supprimer.

 

Voilà !! j'espère que j'ai répondu à tes questions et que maintenant tout est clair. Sinon n'hésites pas à demander des précisions :) !!

 

[Pala.off]

  On 1/30/2025 at 12:29 PM, MohDonto said:

 

Salut !

C'est vrai qu'il y a pas mal d'infos, on va essayer de parler de tout 1 par 1  !

 

Pour commencer, il faut comprendre ce que l'on fait :

 

-> ici on a construit un vecteur lentiviral dans le but de traiter une ß-thalassémie chez un patient. Ce vecteur sera intégré dans le génome d'une cellule productrice qui va produire des particules virales. Ensuite, on va prélever les cellules souches hématopoïétiques du patient et les infecter par ces particules virales. Ainsi, elles pourront exprimer une version fonctionnelle du gène codant pour la ß-globine adulte. La finalité, c'est que les cellules sanguines différenciées à partir de ces cellules souches qu'on aura replacer dans la moelle osseuse du patient après une chimiothérapie (pour supprimer les cellules souches avec le gène défectueux) puissent produire une ß-globine fonctionnelle.

 

Voici le schéma du cours qui résume ce que je viens d'expliquer :

https://ibb.co/qwJq0fD

 

Maintenant on peut essayer de comprendre le schéma :

- En violet, tu as le transgène qui est la version fonctionnelle du gène codant pour la ß-globine

- En jaune, tu as un promoteur (P) pour initier la transcription et un enhancer (E) qui la favorise (dans la séquence enhancer, il y a des séquences d'introns qui ont été ajoutées pour le rendre encore plus efficace, si tu ne comprends pas pourquoi, c'est pas grave, retiens simplement leur but d'amélioration d'efficacité).

- En bleu, tu as des séquences qui stoppent soit la traduction, soit la transcription et qui permettent de contrôler plus précisément l'expression du trasngène. En gros, ça permet que seulement ton transgène soit exprimé et non pas les séquences qui sont à côté et qui pourraient interférer avec ce processus.

- En vert, tu as les séquences LTR et virales :

-> Les séquences LTR(Long Terminal Repeats) permettent l'intégration efficace du vecteur dans le génome de la cellule cible et sa stabilité. C'est des séquences répétées aux extrémités du génome viral, elles ont un rôle avec des enzymes qui vont permettre que ton vecteur puisse être mis dans l'ADN des cellules où tu veux le mettre.

-> Séquences virales, elles servent à la production de particules virales.

 

Pour ta dernière question :

 

La séquence LTR possède des séquences d'épissage, si jamais on le laisse dans le même sens que le transgène, il y a des risques qu'il se retrouve supprimé suite à un épissage non désiré. C'est pour ça qu'on le met à l'envers par rapport à la séquence LTR. C'est comme si mettait du texte à l'envers, le programme de lecture ne pourrait pas le lire donc il ne va pas le supprimer.

 

Voilà !! j'espère que j'ai répondu à tes questions et que maintenant tout est clair. Sinon n'hésites pas à demander des précisions :) !!

 

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Ok merci bcp mais juste une autre question les séquences non codantes comme PB et psi elles se trouvent où ? Et aussi pk LTR dérivé de HIV?
merci 

Edited January 31 by Pala.off

[MohDonto]

  On 1/31/2025 at 8:00 AM, Pala.off said:

Ok merci bcp mais juste une autre question les séquences non codantes comme PB et psi elles se trouvent où ? Et aussi pk LTR dérivé de HIV?
merci 

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Salut, je pense que ces séquences non codantes ne sont pas représentées ici. Sinon, ils ont récupéré le LTR à partir du HIV sûrement parce qu'il est pertinent. Prends ça comme un composant du vecteur. Par exemple, pour construire un marteau, on va choisir du bois dont on a besoin pour le manche à partir d'un arbre. Ici, les chercheurs ont récupéré la séquence LTR dont ils avaient besoin à partir du HIV.

 

Bonne journée ! ;)

[AO234]

@MohDonto

 

Salut, 

 

Je ne comprends pas très bien le lien entre production de particules virales et expression fonctionnelle de la beta-globine. Pourrais-tu me l'expliquer stp ? 

 

[MohDonto]

  On 2/1/2025 at 7:22 PM, AO234 said:

@MohDonto

 

Salut, 

 

Je ne comprends pas très bien le lien entre production de particules virales et expression fonctionnelle de la beta-globine. Pourrais-tu me l'expliquer stp ? 

 

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Salut,

Le lien entre les deux c'est qu'on utilise les particules virales pour infecter les cellules souches hématopoïétiques défaillantes pour la ß-globuline pour qu'elles intègrent dans leur génome le transgène codant pour la ß-globuline fonctionnelle et donc qu'elle pourront coder une ß-globuline fonctionnelle.

 

si tu regardes bien ce schéma : https://ibb.co/qwJq0fD

Tu vois que les cellules souches hématopoïétiques sont modifiées génétiquement à partir de particules virales et pas des vecteurs lentiviraux directement. 

Si tu veux savoir pourquoi, je ne crois pas que ce soit précisément abordé dans le cours, mais j'imagine qu'utiliser des particules virales offre une grande efficacité par rapport à d'autres techniques de thérapies génique. 

 

J'espère que c'est plus clair pour toi ! :)

[AO234]

@MohDonto

 

Mais je comprends pas elles sont composées de quoi ces particules virales.

Si les particules virales sont produites à partir des séquences virales du vecteur lentiviral dans ce cas le transgène codant pour la beta-globine fonctionnelle ne serait pas compris dans les particules virales ? 

 

[MohDonto]

  On 2/1/2025 at 9:04 PM, AO234 said:

@MohDonto

 

Mais je comprends pas elles sont composées de quoi ces particules virales.

Si les particules virales sont produites à partir des séquences virales du vecteur lentiviral dans ce cas le transgène codant pour la beta-globine fonctionnelle ne serait pas compris dans les particules virales ? 

 

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Ces particules virale c'est comme des virus, ils ont une enveloppe, une capside, un génome etc.

 

Séquence virale n'est pas strictement égal à particule viral. Le vecteur lenviral entier possède un ensemble de séquences qui permettent in fine de produire une particule virale. Ainsi, elles contiendront le transgène. N'oublie pas que ce vecteur est de l'information génétique, les particules virales seront produites quand cet ADN intégré sera exprimé par la cellule et ce n'est pas une sorte de fragmentation du vecteur.

 

Dis toi que c'est le même procédé que quand on se fait infecter par un virus et qu'on tombe malade. Le virus se retrouve dans notre circulation sanguine, il entre dans une cellule qui intègre son ADN. Ensuite, la cellule exprime ces informations génétiques qui permettent la productions de nouveaux virus puis après sa mort, ils seront libérés pour infecter de plus en plus de cellules.

 

Ici c'est pareil, on produit des particules virales qui contiennent dans l'informations génétique qu'elles portent le transgène pour qu'elles puissent infecter et modifier génétiquement les cellules cible. La différence entre un virus et ces particules virales, c'est qu'elles ne pourront pas se répliquer dans les cellules souches hématopoïétiques comme le feraient des virus. Elles intègrent juste leur info génétique dans le génome de la cellule.

Edited February 1 by MohDonto

[AO234]

@MohDonto

 

Oook c'est bon je viens de comprendre, merci à toi bonne soirée