Techniques d'études de l'ADN

[Catalyse]

Coucou j'ai besoin de votre aide pour un type d'item en particulier pour connaître la taille d'un plasmide. Pour l'item 1 je trouve 3670 pdb et pour le second je suis un peu perdue. Est ce que vous pouvez m'aider s'il vous plaît ? 

Et j'ai une autre question par rapport à la méthode de Sanger j'ai pas tout compris. Est ce qu'il est possible d'avoir de l'ADN lorsqu'il y a un tampon de lyse ? 

Je ne sais pas si c'est clair 

Merci d'avance :) 

Edited January 24 by Catalyse

[alice.lmq]

Coucou, déjà pour l’item A peux-tu renvoyer l’énoncé en zoomant sur le plasmide pour qu’on voie bien les valeurs stp ?

Ensuite par rapport à la méthode de Sanger il faut bien se rappeler qu’il permet de déterminer la séquence de nucléotides d’une molécule d’ADN par une méthode particulière. 

 

Voici un résumé simple :

1. Préparation de l'ADN : On commence par extraire et préparer l'ADN à séquencer. Ensuite, on le coupe en petits fragments.

2. Amplification : On utilise un processus appelé PCR (réaction en chaîne par polymérase) pour multiplier la quantité d'ADN à analyser.

3. Réaction de séquençage : Dans cette étape, on mélange l'ADN cible avec un amorce (un petit fragment d'ADN qui se fixe à l'ADN cible) et une enzyme appelée ADN polymérase qui va copier l'ADN. Mais, au lieu d'utiliser les bases classiques (A, T, C, G), on utilise des versions modifiées appelées didesoxynucléotides (ddNTP). Ces bases sont similaires aux bases normales, sauf qu’elles bloquent l’ajout d’autres bases après leur incorporation.

4. Les "terminaisons" : Lorsque l'ADN polymérase incorpore un ddNTP au lieu d'un nucléotide normal, la chaîne d'ADN se termine (d’où le nom de "terminaison de chaîne"). Cela génère des fragments d'ADN de différentes longueurs.

5. Séparation des fragments : Les fragments d'ADN sont ensuite séparés par taille à l’aide d'un gel ou d'un appareil de chromatographie liquide. Les fragments les plus courts migrent le plus vite, tandis que les plus longs restent plus près du départ.

6. Lecture des résultats : Les fragments sont détectés par un détecteur qui capte les couleurs associées à chaque base. Chaque ddNTP est marqué par une couleur différente (par exemple, A = vert, T = rouge, C = bleu, G = jaune). En lisant la séquence des couleurs, on peut déterminer l'ordre des bases dans le brin d'ADN.

Donc pour répondre à ta question oui on utilise de l’ADN et on en synthétise (dans l’étape d’amplification).

Je n’ai pas compris ta question par rapport au tampon de lyse.

J’espère que c’est plus clair 

 

[Catalyse]

Merci beaucoup pour ta réponse ! L'item B je suis bloquée aussi 

 

Pour la question sur le tampon de lyse en fait je voulais savoir si avec ce tampon l'ADN pouvait être présent ou non ? 

Edited January 25 by Catalyse

[alice.lmq]

Pour trouver la taille du plasmide recombinant : 

1. Je cherche la taille du fragment que l’on va insérer (insert) : pour cela on regarde le tableau pour trouver la localisation de Hind III. On nous dit que l’enzyme est à 70 pb et 1800. Donc la taille de l’insert est de 1800-70 =1 730 

2. Le plasmide aussi est digéré par HindIII donc je dois aussi enlever toute cette partie qui sera digérée par l’enzyme. Sur le plasmide HindIII se trouve à 1000 et 1400 pb donc on doit enlever à la taille du plasmide initial 400 pb. On se retrouve avec un plasmide qui ne fait plus que 2 200-400 =1 800 pb.

3. Enfin je rajoute mon insert qui fait 1730 pb. J’ai donc un plasmide recombinant qui fait 1800 + 1730 =3 530 pb.

L’item A est vrai

 

Pour l’item B.

Si on récapitule, mon nouveau plasmide recombinant fait 3530 pb. A 1 000 pb se trouve ma première enzyme HindIII, et la suivante se trouve à 1730 (taille de l’insert). Donc pour moi la B est fausse

 

Enfin, concernant le tampon de lyse, il peut en effet permettre d’isoler l’ADN 

C’est plus clair ? 

[Catalyse]

Merci beaucoup @alice.lmq. En fait pour le tampon de lyse je suis tombée sur une correction d'item qui disait qu'on ne pouvait pas mettre d'ADN lorsqu'il y a un tampon de lyse et je ne comprends pas. 

Et juste par rapport à l'item A il est bien faux parce que dans l'énoncé il y a écrit kpdb. Mais je n'arrivais pas à trouver 3530 merci beaucoup de m'avoir donné la démarche détaillée. 

Edited January 25 by Catalyse