Responsable Matière PauliNébuline Posted January 19 Responsable Matière Posted January 19 Salut! Pourquoi il y a un terminateur entre un promoteur eucaryote et c2S30-01? Merci! Quote
Responsable Matière Nentiqu Posted January 19 Responsable Matière Posted January 19 il y a 8 minutes, PauliNébuline a dit : Salut! Pourquoi il y a un terminateur entre un promoteur eucaryote et c2S30-01? Merci! Coucou, si j'ai bien compris enfaite en digérant pGene, tu as PST1 qui coupe avant le gène c2S30-01 et Xho1 qui coupe avant, tandis que sur pPASS, c'est d'abord Xho1 qui coupe, puis PST1, donc le fragment avec le gène c2S30 et le terminateur va s'insérer à l'envers, mettant le terminateur entre c2S30 et le promoteur, mais il me semble qu'en tous les cas le gène aurait été mal transcrit car à l'envers. (c'est en tout cas mon point de vue, en attendant un RM/Tuteur). Bon courage! Quote
Responsable Matière PauliNébuline Posted January 19 Author Responsable Matière Posted January 19 Oui je vois mais si tu prends le petit fragment de pGENE avec le petit fragment de pPASS il s'insere dans le bon sens non? Quote
Responsable Matière Nentiqu Posted January 19 Responsable Matière Posted January 19 il y a 8 minutes, PauliNébuline a dit : Oui je vois mais si tu prends le petit fragment de pGENE avec le petit fragment de pPASS il s'insere dans le bon sens non? On peut pas prendre les deux petits fragments entre eux car on perdrait l'intérêt du plasmide: il faut que le morceau contienne quelque part un point ORI pour pouvoir se répliquer Quote
Responsable Matière PauliNébuline Posted January 19 Author Responsable Matière Posted January 19 Ah oui mince Quote
Solution jlr.10 Posted January 19 Solution Posted January 19 Salut ! Dans ce genre d'exercice il est important de se représenter le plasmide obtenu après la digestion par les enzymes de restriction. Voici le plasmide recombinant (= qui contient le gène d'intérêt, ici c2S30-01) qu'on obtient après une digestion par Pst1 et Xho1 : On remarque alors que entre le gène c2S30-01 et le promoteur eucaryote constitutif il y a un terminateur. Cela signifie alors que lorsque l'ARN polymérase va commencer à lire le plasmide elle commencera au niveau du promoteur eucaryote constitutif puis elle continuera son chemin en lisant le gène de résistance à la kanamycine et terminera sa "lecture" au niveau du terminateur. Comme avant le gène c2S30-01 il n'ya pas de promoteur, rien n'indique à l'ARN polymérase qu'il faut qu'elle transcrit le gène c2S30-01. Ainsi ce gène ne sera pas transcrit, si on réalise une digestion de ces plasmides par Pst1 et Xho1. J'espère que c'est plus claire, n'hésite pas si tu as d'autres questions. Nentiqu, Fodiliaque and dzinthesky 1 2 Quote
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