QCM technique d'étude de l'ADN

[PauliNébuline]

Salut!

Pourquoi il y a un terminateur entre un promoteur eucaryote et c2S30-01?

 

Merci!

[Nentiqu]

il y a 8 minutes, PauliNébuline a dit :

Salut!

Pourquoi il y a un terminateur entre un promoteur eucaryote et c2S30-01?

 

Merci!

Coucou, si j'ai bien compris enfaite en digérant pGene, tu as PST1 qui coupe avant le gène c2S30-01 et Xho1 qui coupe avant, tandis que sur pPASS, c'est d'abord Xho1 qui coupe, puis PST1, donc le fragment avec le gène c2S30 et le terminateur va s'insérer à l'envers, mettant le terminateur entre c2S30 et le promoteur, mais il me semble qu'en tous les cas le gène aurait été mal transcrit car à l'envers.
(c'est en tout cas mon point de vue, en attendant un RM/Tuteur).
Bon courage!

[PauliNébuline]

Oui je vois mais si tu prends le petit fragment de pGENE avec le petit fragment de pPASS il s'insere dans le bon sens non?

[Nentiqu]

il y a 8 minutes, PauliNébuline a dit :

Oui je vois mais si tu prends le petit fragment de pGENE avec le petit fragment de pPASS il s'insere dans le bon sens non?

On peut pas prendre les deux petits fragments entre eux car on perdrait l'intérêt du plasmide: il faut que le morceau contienne quelque part un point ORI pour pouvoir se répliquer

[PauliNébuline]

Ah oui mince

[jlr.10]

Salut ! 

 

Dans ce genre d'exercice il est important de se représenter le plasmide obtenu après la digestion par les enzymes de restriction. 

 

Voici le plasmide recombinant (= qui contient le gène d'intérêt, ici c2S30-01) qu'on obtient après une digestion par Pst1 et Xho1 : 

 

On remarque alors que entre le gène c2S30-01 et le promoteur eucaryote constitutif il y a un terminateur. Cela signifie alors que lorsque l'ARN polymérase va commencer à lire le plasmide elle commencera au niveau du promoteur eucaryote constitutif puis elle continuera son chemin en lisant le gène de résistance à la kanamycine et terminera sa "lecture" au niveau du terminateur. Comme avant le gène c2S30-01 il n'ya pas de promoteur, rien n'indique à  l'ARN polymérase qu'il faut qu'elle transcrit le gène c2S30-01. Ainsi ce gène ne sera pas transcrit, si on réalise une digestion de ces plasmides par Pst1 et Xho1. 

 

J'espère que c'est plus claire, n'hésite pas si tu as d'autres questions. 

[zblorbe]

Salut, je comprends pas bien pourquoi le plasmide recombinant fait 2985 paires de base ?

J'arrive pas à voir où on a coupé et où on a rajouté le fragment ?

Merci

[An-Schwann]

9 minutes ago, zblorbe said:

Salut, je comprends pas bien pourquoi le plasmide recombinant fait 2985 paires de base ?

J'arrive pas à voir où on a coupé et où on a rajouté le fragment ?

Merci

Salut! 

Où est ce qu'il est indiqué que le plasmide recombinant fait 2985 paire de base?

[zblorbe]

Dans un des items du qcm

[An-Schwann]

36 minutes ago, zblorbe said:

Salut, je comprends pas bien pourquoi le plasmide recombinant fait 2985 paires de base ?

J'arrive pas à voir où on a coupé et où on a rajouté le fragment ?

Merci

J'ai tendance à être d'accord avec toi et que le plasmide recombinant devra pas faire 2985 paire de base. Il est indiqué qu'on veut exprimé l'ADNc de façon spécifique au cellule tumorale. Pour cela il faut mettre l'ADNc sous le contrôle du promoteur eucaryote spécifique tumorale. Pour cela tu utilise Bamh1 et Mbol qui permet d'extraire l'ADNc codant le gène d'intérêt et de la mettre dans le plasmide pPASS, ce qui te donne au final un plasmide de 4170 pdf.

Peut tu envoyer l'item complet pour voir si ils utilisent pas des enzymes different?