jss.maypo Posted January 13 Posted January 13 Bonjour, j'aurai besoin de votre aide pour répondre à ce type de qcm : Source : S2 colle n°2 Année : 2022-2023 QCM 3 - Une équipe de chercheuses cherche à modifier génétiquement des cellules tumorales de rat pour qu’elles produisent la protéine p. Pour cela elles utilisent un plasmide pLoulou contenant un promoteur procaryote suivis d’un ADNc codant la résistance à l’ampicilline et un ADNc codant la protéine p suivie d’un terminateur. Après avoir isolé la séquence d'intérêt dans pLoulou elles l'insèrent dans pMimi, on obtient alors pFinal, le vecteur recombinant permettant à p de s’exprimer dans les cellules eucaryotes tumorales. A.La digestion de pLoulou par EcoR1 nous permet d’obtenir 4 fragments de restriction. B.Pour obtenir pFinal, les chercheuses ont utilisé les enzymes de restriction Pst1 et Noct1. C.Pour isoler la séquence d'intérêt, les chercheuses peuvent utiliser l’enzyme de restriction HindIII. D. Le plasmide pFinal fait 7875 pb. E.On peut sélectionner les cellules de rat tumorale transfectées par pFinal grâce à la GFP. Réponses : BC --> Quand est ce qu'on doit prendre en compte les promoteurs ? ---> Comment savoir quelle enzyme de restriction utiliser ? Faut-il avoir le promoteur dans la séquence qu'on transfère ? QCM 4 - Une équipe de chercheuses cherche à modifier génétiquement des cellules tumorales de rat pour qu’elles produisent la protéine p. Pour cela elles utilisent un plasmide pLoulou contenant un promoteur procaryote suivis d’un ADNc codant la résistance à l’ampicilline et un ADNc codant la protéine p suivie d’un terminateur. Après avoir isolé la séquence d'intérêt dans pLoulou elles l'insèrent dans pMimi, on obtient alors pFinal, le vecteur recombinant permettant à p de s’exprimer dans les cellules eucaryotes tumorales. A.La digestion de pFinal par l’enzyme Hindlll nous permet d’obtenir 3 fragments de restriction. B.Toutes les cellules transfectées par pFinal pourront être sélectionnées par leur résistance à l'ampicilline. C.La protéine p est produite par toutes les cellules transféctées. D.Si on transforme des cellules de rat avec pLoulou elles seront résistantes à l'ampicilline. E.On peut sélectionner les cellules transfectées avec la kanamycine. Réponses : AE --> Les items B, D et E j'ai pas très bien compris la correction..? Merci beaucoup pour vos réponses ! Quote
Solution Aaronigashima Posted January 13 Solution Posted January 13 7 minutes ago, jss.maypo said: Bonjour, j'aurai besoin de votre aide pour répondre à ce type de qcm : Source : S2 colle n°2 Année : 2022-2023 QCM 3 - Une équipe de chercheuses cherche à modifier génétiquement des cellules tumorales de rat pour qu’elles produisent la protéine p. Pour cela elles utilisent un plasmide pLoulou contenant un promoteur procaryote suivis d’un ADNc codant la résistance à l’ampicilline et un ADNc codant la protéine p suivie d’un terminateur. Après avoir isolé la séquence d'intérêt dans pLoulou elles l'insèrent dans pMimi, on obtient alors pFinal, le vecteur recombinant permettant à p de s’exprimer dans les cellules eucaryotes tumorales. A.La digestion de pLoulou par EcoR1 nous permet d’obtenir 4 fragments de restriction. B.Pour obtenir pFinal, les chercheuses ont utilisé les enzymes de restriction Pst1 et Noct1. C.Pour isoler la séquence d'intérêt, les chercheuses peuvent utiliser l’enzyme de restriction HindIII. D. Le plasmide pFinal fait 7875 pb. E.On peut sélectionner les cellules de rat tumorale transfectées par pFinal grâce à la GFP. Réponses : BC --> Quand est ce qu'on doit prendre en compte les promoteurs ? ---> Comment savoir quelle enzyme de restriction utiliser ? Faut-il avoir le promoteur dans la séquence qu'on transfère ? QCM 4 - Une équipe de chercheuses cherche à modifier génétiquement des cellules tumorales de rat pour qu’elles produisent la protéine p. Pour cela elles utilisent un plasmide pLoulou contenant un promoteur procaryote suivis d’un ADNc codant la résistance à l’ampicilline et un ADNc codant la protéine p suivie d’un terminateur. Après avoir isolé la séquence d'intérêt dans pLoulou elles l'insèrent dans pMimi, on obtient alors pFinal, le vecteur recombinant permettant à p de s’exprimer dans les cellules eucaryotes tumorales. A.La digestion de pFinal par l’enzyme Hindlll nous permet d’obtenir 3 fragments de restriction. B.Toutes les cellules transfectées par pFinal pourront être sélectionnées par leur résistance à l'ampicilline. C.La protéine p est produite par toutes les cellules transféctées. D.Si on transforme des cellules de rat avec pLoulou elles seront résistantes à l'ampicilline. E.On peut sélectionner les cellules transfectées avec la kanamycine. Réponses : AE --> Les items B, D et E j'ai pas très bien compris la correction..? Merci beaucoup pour vos réponses ! Salut, pour le premier QCM : il faut toujours prendre en compte les promoteurs. Pour qu'un ADNc d'un plasmide puisse être fonctionnel, il faut obligatoirement qu'il soit précédé d'un promoteur, qui lui décidera sur quel type de cellules l'ADNc agira. Ainsi, pour choisir les enzymes de restriction, il faut forcement des enzymes de restriction qui sont après le promoteur sur le plasmide où on va intégrer le gène d'intérêt et avant le terminateur. Il faut aussi également que les enzymes de restrictions utilisées encadrent bien le gène d'intérêt et que les MEMES enzymes soient utilisées sur les 2 plasmides. Ici les enzymes de restriction qui répondent à toutes ces conditions sont Pst1 et Noct1 si tu veux intégrer l'ADNc codant la proteine p dans le plasmide pMimi apres le promoteur eucaryote tumoral (comme demandé dans l'énoncé). Tu te retrouves donc avec un pFinal qui est equivalent a pMimi mais auquel on remplace le gène sans intérêt entre ses Pst1 et Noct1 par toute la partie entre Pst1 et Noct1 dans pLoulou, soit l'ADNc codant la resistance a l'ampicilline et la proteine p. A noter que dans pFinal tous les ADNc sont précédés d'un promoteur ! Pour le 2e QCM pour la A : dans pFinal tu te retrouves avec 2 sites Hindlll donc 3 possibilités de fragments (un petit, un moyen, et un qui correspond au plasmide entier au cas ou il s'est recombiné) => vrai pour la B : ton promoteur est un promoteur spécifique aux cellules tumorales donc toutes les cellules qui ne sont pas eucaryotes ET qui ne sont pas tumorales ne pourront pas etre selectionnees par leur résistance à l'ampicilline => faux pour la C : pareil, l'ADNc codant la protéine p sera apres un promoteur spécifique aux cellules eucaryotes tumorales donc il n'y aura que les cellules tumorales eucaryotes qui produiront cette protéine p => faux pour la D : premierement on ne transforme pas des cellules de rat (cellules eucaryotes) mais on les transfecte donc rien que ca suffit pour mettre l'item faux. Mais en plus meme si on met ca de coté, dans pLoulou la resistance a l'ampicilline est précédée par un promoteur procaryote. Sachant que le rat (comme l'humain) est constitué uniquement de cellules eucaryotes, l'ADNc de résistance à l'ampicilline n'aura aucun effet sur le rat => faux pour la E : la kamanycine est précédée par un promoteur constitutif, donc dans toutes les cellules sans exception. Il est donc possible de sélectionner les cellules transfectées avec la kamanycine dans toutes les cellules du rat. J'espere ne pas m'etre trompé (au pire un tuteur/RM pourra toujours me corriger) et je te souhaite une très bonne journée ! Fodiliaque and jss.maypo 1 1 Quote
Responsable Matière dzinthesky Posted January 13 Responsable Matière Posted January 13 Coucou @jss.maypo ! Je confirme la super réponse de @Aaronigashima, futur tuteur/RM recherche çaa Bon courage !! Fodiliaque, jss.maypo and Aaronigashima 1 1 1 Quote
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