Technique d’étude heelp

[Insss2K2]

Salut, j’ai essayer de faire l’exo 3 du poly du tat et j’avais plusieurs qst ( dsl j’ai pas réussi à mettre les photos )

- par rapport à l’item C ci-dessous, c’est le fragment clivés par les 2 sites de restriction qui est inséré dans le vecteur recombinant ( vecteur recombinant et fonctionnelle c pareil ? )

- lorsque le fragment que clive les 2 sites est grand comment être sur de choisir le bon ? Est ce que c’est tjr le plus petit ?

« Après coupure par Nnn et Yyy, le plasmide pINKD va soit perdre le gène de résistance à la généticine et Ori, soit le gène de résistance à l'ampicilline avant d'intégrer l'insert clivé. Puisque le vecteur recombinant doit conserver Ori pour fonctionner, il n'y aura pas de gène de résistance à l'ampicilline dans les vecteurs fonctionnels. c'est donc le gène de résistance à l'ampicilline qui est éliminé du vecteur recombinant. Ainsi, les bactéries transformées ne seront pas sélectionnées avec de l'ampicilline. »  Ori n’est pas déjà présente dans le vecteur accepteur ? Et les fragments insérer ne conserve pas toujours Ori dans les autres exemples je trouve pas ça logique 

 

- Pour la correction du D la fluorescence n’étais pas mentionner donc j’ai pas pu comprendre 

 

QCM 3 - Parmi les propositions suivantes, quelle(s) est(sont) la(les) réponse(s) vraie(s) :

C)On digère le plasmide pINKD et l'insert avec Nnn et Yyy, puis on transforme des bactéries avec le vecteur recombinant obtenu. Les bactéries recombinantes seront sélectionnées avec de l'ampicilline.

D) On digère le plasmide pINKD et l'insert avec Nnn et Eee, puis on transfecte des cellules eucaryotes avec le vecteur recombinant obtenu. Au bout de quelques heures, les cellules peuvent prendre une teinte fluorescente.

 

voila ça fait un peu bcp je sais mais si qlq peut m’aider 

 

 

[Anakin_Skywalker]

Salut ;

Bon pour commencer on est tous pareil, l’item C est un peu mal forme sinon la diff entre un vecteur de combinant et fonctionnelle c’est que le combinant contient l’ADN insérer mais on est ps sûr qu’il va fonctionner correctement par contre le fonctionnelle l’ADN est insérer et fonctionnelle comme l’indique son nom.

Pour ta 2eme qst chuis sur de bien comprendre ce que tu veux dire mais d’après ce que j’ai compris faut que l’ori soit présent présent ainsi que le gène de résistance.

Apres j’ai pas fait trop d’exos du coup j’attends des réponses tous comme toi

En tous cas le S2 démarre bien déjà J

[Insss2K2]

Merci ça m’éclaire deja un peu en attendant d’avoir une réponse ! La pour le coup le S2 pouvait pas démarrer mieux ça c’est sûr 
 

[dzinthesky]

Coucou @Insss2K2 et @Anakin_Skywalker ! 

Le 07/01/2025 à 21:56, Anakin_Skywalker a dit :

Bon pour commencer on est tous pareil, l’item C est un peu mal forme sinon la diff entre un vecteur de combinant et fonctionnelle c’est que le combinant contient l’ADN insérer mais on est ps sûr qu’il va fonctionner correctement par contre le fonctionnelle l’ADN est insérer et fonctionnelle comme l’indique son nom.

Yess c'est ça, je confirme !!

 

Le 07/01/2025 à 21:22, Insss2K2 a dit :

lorsque le fragment que clive les 2 sites est grand comment être sur de choisir le bon ? Est ce que c’est tjr le plus petit ?

Je suis pas sûre d'avoir compris ta question, pour moi la question que tu poses est la suivante : comment savoir si tu coupes dans le sens Yyy à Nnn ou bien de Nnn à Yyy? Si c'est pas ça n'hésite pas à reformuler !! Si c'est bien ça ta question alors oui, tu regardes la position de tes sites de restriction (pb) et plus c'est petit plus tu seras au début. Donc ici, en clivant avec ces enzymes de restriction, tu vas cliver : le promoteur eucaryote, le séquence de résistance à la géniticine, la queue polyA, Ddd, et Ori. À la place t'auras ton fragment avec le gène d'intéret dnsLMSN. 

Du coup tu pourras pas sélectionner le vecteur fonctionnel avec la généticine.

Le 07/01/2025 à 21:22, Insss2K2 a dit :

D) On digère le plasmide pINKD et l'insert avec Nnn et Eee, puis on transfecte des cellules eucaryotes avec le vecteur recombinant obtenu. Au bout de quelques heures, les cellules peuvent prendre une teinte fluorescente

Pour cet item, la fluorescence ça vient de la GFP, t'inquiètes pas vous allez voir comment ça fonctionne en cours très bientôt. Cependant ici si tu clives avec Nnn et Eee tu pourras pas exprimer la cassette d'expression puisqu'elle est coupé avec la queue polyA donc tu pourras pas obtenir ta protéine. Pas d'expression de GFP, pas de fluorescence. Autrement si on clive après, tu pourras obtenir ta protéine, exprimer la GFP et avoir de la fluorescence.

 

Est-ce que c'est plus clair? Si jamais n'hésitez pas à poser des questions !!

Bon courage

[Insss2K2]

Ouiii en fait ma qst c’était est ce que le fragment clivé par les enzymes est toujours plus petit que le reste du plasmide ? Et concernant Ori je comprend qu’il est essentiel pour la lecture de l’ADN mais n’est il pas déjà présent sur le vecteur recombinant, pourquoi le conservé ? Je sais pas si c’est clair

 

c’est donc la GFP merciii j’avais pas fait le lien !!

[dzinthesky]

Tes enzymes vont cliver lorsqu’elles reconnaissent le site de restriction qui leur correspond. Le nombre de fragments que tu obtiens à l’issue du clivage va donc dépendre du nombre de sites présents.

Si dans ton vecteur recombinant tu as 1 BAMH1, lorsque tu vas cliver avec BAMH1 tu vas faire 1 coupure et obtenir 1 fragment, quand t’as 2 sites tu vas obtenir 2 fragments etc …

La taille des fragments dépend de la position de tes sites de restriction.

Il y a 1 heure, Insss2K2 a dit :

Et concernant Ori je comprend qu’il est essentiel pour la lecture de l’ADN mais n’est il pas déjà présent sur le vecteur recombinant, pourquoi le conservé ?

Il est présent sur le vecteur vide, après coupure tu obtiens 2 fragments dont l'un avec ORI et l'autre sans. Comme tu l'as bien compris ORI est essentiel, donc on va conserver le fragment contenant ORI donc la résistance à la geniticine, cependant on va perdre la cassette de résistance à l'ampicilline : https://zupimages.net/viewer.php?id=25/02/u6p5.png peut-être que ce gribouillage va t'aider ahaha

 

C'est plus clair? N'hésite pas si tu as d'autres questions !!

Bon courage !!

[Insss2K2]

AAhhhhhh je viens de comprendre eft je pensais que ce qu’on clivé avec Ori dedans allait être insérer dans un autre vecteur alors que c’est le vecteur recombinant, autant pour moi mdrr merciii en tous cas sache que c’est ton griboulli qui m’a illuminer haha !