talatsuoc Posted October 28, 2016 Posted October 28, 2016 Bonjour a tous ! avec monsieur Levade nous avons étudiés les ribosondes. cependant, je ne comprends pas ce mécanisme ainsi que le schéma qu'il nous a donné. Comment est ce qu'une ribosondes agit ? merci
Solution julielns Posted October 29, 2016 Solution Posted October 29, 2016 Coucou ! Déjà une ribosonde est une séquence d'ARN. Le schéma te montre comment fabriquer une ribosonde. Au début tu as un vecteur d'ADN circulaire. Il contient une sonde constitué d'ADN ainsi qu'un promoteur SP6. Tu utilises une enzyme de restriction pour couper le vecteur et récupérer uniquement ta sonde et son promoteur. Ensuite tu ajoutes des NTP marqués et une RNA polymerase SP6, c'est à dire qui utilise un promoteur SP6 pour débuter la synthèse d'un brin d'ARN. La RNA polymerase va alors synthétiser des sondes simple brin constitués d'ARN, se sont des ribosondes. Maintenant que les ribosondes sont faites, tu enlèves le reste : la matrice de DNA, la polymerase, les NTP.... Tu détruis la matrice grâce à une DNAse de type 1 et tu enlèves les nucléotides marqués par la technique de gel filtration. Enfin tu récupères les ribosondes, de ton mélange ribosondes/RNA polymerases, par extraction au phénolchloroforme. Tu utilises ta ribosonde pour marquer des séquences d'ARN J'espère que c'est plus clair ! Bon courage
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