technique PCR

[sesamoïde]

salut! est-ce que quelqu'un pourrait m'éclairer sur la PCR ?

 

j'ai compris qu'il y en avait deux, mais j'ai toujours du mal à les différencier, fin surtout de capter les différences entre elles, et pourquoi il en existe deux et dans quelles situations on les utilise :')

[Jojoba]

 

Salut !

Alors La PCR (Polymerase Chain Reaction) c’est une méthode pour amplifier des fragments d’ADN. Les deux principales formes de PCR que tu confonds sont probablement :

- La PCR classique

- La PCR quantitative (qPCR) ou PCR en temps réel

 

Tout d’abord tu as la PCR classique : Amplification qualitative

 

Le but principal est d’amplifier un fragment d’ADN spécifique pour le détecter.

Après plusieurs cycles tu obtiens une grande quantité d’ADN, mais ce processus est QUALITATIF car il ne te donne pas directement d’information sur la quantité initiale d’ADN cible. Ton résultat est souvent visualisé à la fin sur un gel d’agarose grâce à une électrophorèse (l’ADN amplifié apparaît comme une bande).

 

Les étapes principales sont :

La dénaturation : L’ADN double brin est séparé en deux brins simples (~95 °C).

L’Hybridation : Les amorces se fixent à leurs séquences complémentaires (~50-65 °C).

L’Élongation : Une enzyme (Taq polymérase) synthétise de nouveaux brins d’ADN (~72 °C).

 

Ce qui est avantageux avec cette technique c’est qu’elle est simple et peu coûteuse.

Souvent idéale si tu veux confirmer la présence ou l’absence d’un fragment d’ADN.

 

Elle est cependant non quantitative (on ne peut pas mesurer la quantité d’ADN initial) et peu sensible ( les faibles quantités d’ADN peuvent passer inaperçues).

 

Pour te donner des exemples d’utilisation :

Tu as la vérification de la présence d’un gène particulier dans un échantillon.

Aussi le diagnostic simple (ex. identification d’un pathogène).

 

Ensuite la PCR quantitative (qPCR) : Amplification et quantification

 

Son objectif c’est d’amplifier un ADN spécifique et mesurer sa quantité en temps réel.

 Cette méthode utilise des molécules fluorescentes (ex. SYBR Green ou sondes spécifiques comme TaqMan) pour détecter l’ADN amplifié à chaque cycle.

 La fluorescence est proportionnelle à la quantité d’ADN amplifié, ce qui permet une mesure précise de l’ADN initial.

 

Les différences clés avec la PCR classique c’est que la PCRq est elle QUANTITATIVE : Elle permet de mesurer la concentration initiale d’ADN grâce à une courbe standard. Et tu n’as du coup pas d’électrophorèse car les résultats sont analysés directement par la machine (pas besoin de gel d’agarose).

 

C’est une technique qui est très sensible et spécifique. Elle te permet d’évaluer précisément la quantité d’ADN dans un échantillon.

Elle reste plus coûteuse et technique que la PCR classique.

 

Des exemples d’utilisation :

-La mesure de la charge virale dans des échantillons cliniques (ex: COVID-19, VIH).

-L’Étude de l’expression de gènes (ex: RT-qPCR pour l’ARN).

 

J’espère que je t’ai un peu éclairé :) Bon courage !!

 

[sesamoïde]

@Jojoba Woa, c'est super complet merci beaucoup!!! passe une bonnne journée <3