Chromatographie

[Catalyse]

Coucou, est ce que vous pouvez me donner la différence entre une chromatographie d'échange de cations et d'anions ? Et est ce que vous pouvez me donner l'ordre de départ des molécules à partir des pH pour chacune d'entre elles ? 

Je bloque avec ce QCM et j'ai l'impression que je n'ai pas trouvé les bonnes valeurs pour les AA 

Pour les dipeptides je n'y arrive pas non plus 

Merci d'avance 

Edited December 4, 2024 by Catalyse

[Emmaléole]

Cc alors pour une chromatographie échangeuse de cation, comme cela est dit dans le nom tu vas échanger des cations. Les cations étant des molécules chargés positivement, pour pouvoir faire ta chromatographie il faut que des le début tes molécules soit toutes fixées sur ta colonne. Il faut forcément que ta colonne soit chargé négativement. C’est le même raisonnement pour la chromatographie échangeuse d’anions mais dans le sens inverse. De plus comme tu veux que tout tes AA soit chargés positivement tu vas mettre comme pH de base sur ta chromatographie un PH faible comme ça toi tout tes AA seront déprotoné et chargé positivement ( ph<phi = AA chargés positivement). Ensuite pendant l‘ expérience tu augmentera petit à petit ton pH pour arriver au Phi des Différents AA. Ils seront ensuite chargé négativement et s’éluderont (pH>phi = AA chargés négativement comme la colonne donc ils ne tiennent plus dessus). 

 

Ensuite on calcule le Phi de chacun des AA ici présents: 

- leu est un AA neutre qui a une fonction α aminé et α carboxylique : (9,3+2,1)/2=5,7 

- asp est une AA acide avec 2 fonctions carboxylique α et en β: (2,1+4)/2=3,05 

- Lys est un AA avec 2 fonctions amine en α et en ε: ( 10,5+9,3)/2=9,9 

Maintenant que tu as toute ces informations, tu vas avoir en premier l’élution de de l’asp , puis de la leu et enfin la Lys ( 3,05<5,7<9,9). 

 

Conclusion : vrai CDE

 

J’espère que cela à pu t’aider, n’hésite pas si tu as d’autres questions!

[Catalyse]

Merci beaucoup ! Et donc pour les échangeuses d'anions on part du pH élevé ? Est ce que tu peux m'aider pour calculer le pHi des dipeptides je n'y arrive pas ? Je suis bloquée à la C. 

 

[Emmaléole]

Oui c’est ça car pour avoir tes AA chargés négativement il faut que le pH > phi. 

Je te mets ici le lien d’un post qui t’explique la méthode pour calculer le Phi d’un peptide: 

j’espère que cela t’aidera à mieux comprendre ! N’hésite pas si tu as des questions. 

[Catalyse]

Est ce que si je calcule le pHi des molécules séparées et que je fais la moyenne des deux c'est bon ? 

[Emmaléole]

Non je ne pense pas que tu trouveras la bonne valeur, il vaut mieux que tu suives la méthode au moins tu es sûre qu’il n’y aura pas de problème.

[Catalyse]

Je vais encore t'embêter alors parce que je n'arrive pas à trouver le bon pHi en suivant la méthode ...

Est ce que tu peux me l'expliquer d'une autre façon s'il te plaît ? 

Edited December 4, 2024 by Catalyse

[Paulimère]

@sofiaspirine @dzinthesky ?

[sofiaspirine]

Coucou! Je vais te détailler la méthode:

• On cherche un pH pour lequel la charge globale de notre peptide est 0
• Ici ce qui nous importe ce sont les pk des chaines latérales. On voit que à pH 5 on aura notre lysine chargée + et notre glutamate chargé - donc au global on aura une charge du peptide qui est nulle pile ce qu'on cherche.
• Ensuite, on check les valeurs des pk qui encadrent cette valeur de pH = 5 on voit ici que c'est : 4 et 9,3 on fait donc (4 + 9,3)/2 = 13,3/2 = 6,65

Voila j'espère que c'est plus clair!