Enzymes de restriction : clonage dans la bonne orientation

[Chloe-M]

Bonsoir!

 

Dans plusieurs QCM d'annales je retrouve des item qui demandent si la digestion du produit de PCR par telle ou telle enzyme de restriction peut permettre le clonage du fragment dans la bonne orientation.

Quelqu'un saurait comment procéder pour ce genre de question, parce que je n'ai jamais vraiment compris comment faire..

Merci!!!

[AnaisLcs]

Bonsoir ! 

 

Alors, pour ce type de qcms il faut que tu regardes si les enzymes de restrictions qui coupent ton fragment génèrent des extrémités compatibles avec celles de ton vecteur, et pour savoir s'il sera dans la bonne orientation tu dois vérifier que l'extrémité 5' de ton fragment se trouve du coté du site d'initiation de la transcription (du côté de la première coupure au niveau du vecteur) et ton extrémité 3' de l'autre coté, au niveau de la seconde coupure du vecteur.

J'espère avoir étais assez claire, si jamais je peux essayer de te l'expliquer autrement. 

[Chloe-M]

Je pense avoir compris, merci beaucoup!