Séquençage sanger

[Naëlatence]

Salut, j’ai oublié deja quand on fait un séquencage sanger l’amorce s’hybride avec le brin 3’ 5’ et donne sur la pcr la séquence de 5’3’ mais à quoi correspondent-ils ? Qui est le brin codant, lu, non lu etc… ? Je me perds à chaque fois avec ça

 

merci d’avance pour vos réponses !

 

et d’ailleurs est ce que dans la méthode sanger classique, il y quelque chose qui est marqué comme c’est le cas pour l’automatique avec les ddntp qui sont marqués ? 

Edited March 23, 2024 by Naëlatence

[Mitose64]

Coucou @Naëlatence,

 

Alors un amorce est tout le temps de 5' --> 3' donc cela signifie que elle s'hybride avec un brin de 3' -->5' et va donc permettre d'obtenir la séquence (en 5' --> 3') inverse du brin matrice. Si ta matrice correspond au brin codant, tu vas donc obtenir l'inverse du brin codant (le brin non codant donc).

Après je sais pas si c'est ta question mais le brin codant correspond au brin qui va être lu pour faire l'ARNm (c'est donc l'inverse de l'ARNm qui lui correspond au brin non codant).

Et pour finir il me semble que dans la sanger classique, les amorces sont radiomarquées tandis que dans la sanger automatique les ddNTP sont couplés à des fluorochromes.

 

Voila, en espérant que j'ai bien répondu à tes questions !

 

Bonne soirée ! :)